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2.2.5 高速逆流色谱分离纯化 11
2.2.6 各萃取相和分离的组分的生物活性实验 13
2.2.7 单一化合物抗肿瘤活性活性实验 13
3 结果与讨论 14
3.1 桑黄菌丝体醇提物不同萃取相鉴定实验结果 14
3.2 乙酸乙酯部分柱层析分离纯化单一化合物 16
3.2.1 乙酸乙酯部分柱层析分离纯化单一化合物结构 16
3.2.2 乙酸乙酯部分柱层析分离纯化化合物的理化常数和光谱数 16
3.3 高速逆流色谱分离纯化 16
3.3.1 高速逆流色谱图 17
3.4 高速逆流色谱分离纯化得到的单一化合物 18
3.4.1 单一化合物结构 18
3.4.2 单一化合物的理化常数和光谱数据 19
3.5 桑黄菌丝体不同萃取相抗肿瘤活性 22
3.5.1 对HepG2肝癌细胞作用 22
3.5.2 对K562癌细胞作用 22
3.6单一化合物抗肿瘤活性实验 23
3.6.1对HepG2肝癌细胞作用 23
3.6.2对K562细胞增殖的抑制作用 24
3.6.3体外抑制L1210肿瘤细胞生长实验 25
3.6.4对SW620结肠癌细胞的作用实验 25
3.6.5对MCF7乳腺癌细胞的作用实验 26
4 结论与展望 27
4.1 结论 27
4.1.1 桑黄菌丝体醇提物不同萃取相鉴定结果 27
4.1.2 桑黄菌丝体乙酸乙酯部分的柱层析分离纯化实验结果 28
4.1.3 高速逆流色谱分离纯化实验结果 28
4.1.4 桑黄菌丝体不同萃取相抗肿瘤活性测定结果 28
4.1.5单一化合物抗肿瘤活性活性实验结果 28
4.2 讨论 28
4.3 展望 29
致谢 30
参考文献 31
1 绪论
1.1 桑黄研究概况
桑黄菌是近年来开发的一种多年生药用真菌，《药性论》中称桑臣、桑耳，《酋阳杂俎》中称胡孙眼，《篡要奇方》中又称桑黄菇。因该菌在我国中南地区通常生长在桑属植物上，且子实体为黄褐色而得名[1]。桑黄属担子菌亚门、多孔菌科、木层孔菌属,又称桑臣、桑耳、胡孙眼、鲍氏层孔菌、针裂蹄(裂蹄),是一种珍贵的药用真菌,有森林黄金之美称。
桑黄菌种种类也比较多，国内对桑黄的研究以火木层孔菌、裂蹄木层孔菌、鲍氏层孔菌为主[2]。据药性论记载:桑黄微苦,性寒,在我国传统中药中用于治疗痢疾、盗汗、血崩、血淋、脐腹涩痛、脱肛泻血、带下、闭经[3];在日本作为利尿剂使用[4]。
由于桑黄菌生理状态的特殊性和复杂性，生长周期又很长，需2～3年[5]，并且桑黄的生长对外部环境有一定的要求，故桑黄的人工栽培难度较大。目前在韩国已有桑黄的人工栽培和批量生产，但国内桑黄的栽培还未成规模，栽培技术还尚不成熟。目前主要应用于肝炎及癌症的治疗,因其治疗效果显著,风靡于日本及韩国,畅销不衰,并已经开始人工栽培并批量生产,美国和西欧对桑黄也略有研究。国内外桑黄研究较多集中于深层发酵条件优化、多糖分子结构、抗癌免疫学机理等[6]。现代研究表明，桑黄具有较好的抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、降血糖等诸多生物活性，其活性成分主要为多糖、萜类、黄酮类、甾醇类等[7-9]。
1.2 桑黄菌丝体研究概况
目前，市场上的桑黄大多以桑黄子实体及其粗加工的制品形式出现，然而，在自然界中形成的桑黄子实体稀少，人工栽培难度较大，国际医药市场上价格昂贵、供不应求。因此，菌丝体替代子实体发挥功效备受研究者的关注。