1。3。2对峙培养法

采用对峙培养法对供试植物内生真菌的拮抗作用进行初筛。分别将获得的植物内生真菌分别接种于平板边缘，病原菌与内生真菌保持一定的距离并且接种于平板边缘，一般相距 25mm, 以病原菌与病原菌的的对峙实验作为对照组（CK），实验组和对照均重复3次，置于 28℃下恒温避光培养7d后，观察病原真菌菌落周围的变化，采用十字交叉法测其抑菌圈直径，取其平均值为抑菌圈大小，初步筛选出对病原菌生长具有抑制作用的内生真菌。

1。3。3菌块法

采用菌块法来测定内生真菌对于病原菌的拮抗作用，按无菌操作法接入病原菌于培养皿中，取融化并保温在 45℃左右的PDA培养基倒入无菌培养皿中制成平板后，轻轻以手搓法摇动使其混匀，待培养基稍微凝固后迅速用灭菌接种环取内生真菌菌块3~4块（直径约 5 mm），分 3~4 点等距离均匀放置，距皿边缘距离不小于 10 mm，小心放入培养基中，尽量使菌块带菌丝的一面贴在培养基表面，用封口膜密封后将培养皿置低温 10℃下保持大约14 h后，使菌块中的抗菌素扩散，再将皿置于 28℃下恒温培养大约7d后，取出观察内生真菌菌落周围的抑菌圈，并测定抑菌圈直径[7]。

1。4基本实验内容

本实验以药用植物飞蓬草茎部作为为植物实验材料，从中分离出茎部内生真菌，利用形态学和分子生物学方法对其种属进行鉴定；通过平板对峙实验，挑选出最佳指示病原菌；接着茎部内生真菌及其发酵产物进行抑菌实验。为进一步研究和开发飞蓬草的生物农药活性提供参考。文献综述

1 材料与方法

1。1  实验材料

1。1。1植物材料

实验材料飞蓬草来源于2016年6月采集于杭州师范大学，在晴朗天气，选取生长良好、无病虫害、健壮的飞蓬草植株。采集好后立即用保鲜膜包好，置于保鲜盒内良好密封，在12h内处理样品，并且开始对茎部进行初步的分离，为初步获得茎部内生真菌做好准备