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目前在天然产物分离纯化过程中,一般先利用经典常用的分离方法例如蒸馏分离、结晶、沉淀、萃取和各类传统包括大孔吸附树脂、硅胶柱色谱在内的色谱分离法。针对微生物天然产物进行分离纯化,最后采用制备型高效液相色谱法制备化合物。
十九世纪三十年代诞生了摇瓶培养技术,简便、实用,稳定的特性,使得其在微生物菌种筛选、实验室大规模发酵试验、种子培养等方面应用广泛。本实验采用摇床培养技术进行种子扩大培养,原因之一是在摇瓶培养过程中振荡有利于提高活细胞的氧气和营养物的供给效率,提高发酵产物的含量。
近年来大孔吸附树脂技术发展迅速,大孔吸附树脂本质是一种有机高分子聚合物吸附剂,其原理是是选择性地吸附发酵液中的混合物,然后再利用特定溶剂洗脱使混合物分离纯化的一种方法[3],大孔网状结构和较大的比表面积的优异特性,可通过
物理
吸附选择性地有目的性从水溶液中吸附目标产物。在实验过程中具有吸附快,洗脱率高,可再生等优点[4.5],其应用日趋广泛,特别是在微生物天然产物的分离纯化方面逐渐显示出其优越性。
种类繁多的天然产物,所含化学成分种类繁多,不少结构相似并且含量高低不一大大提高了分离难度,常规方法进行分离、纯化微生物天然产物难度极高。进行微观层面研究更是无从谈起。本实验后阶段所使用的高效制备液相色谱作为近年来微生物天然产物研究中的重要手段。具有分离度高、灵敏度和较大的样品通量的特点。本实验最后能够分离纯化微生物天然产物中的有效成分主要得益于高灵敏性和高效性的高效制备液相色谱仪。
本实验利用云南3号库筛到的白色链霉菌,经培养基培养发酵得到培养液,后经上柱,液相分析得到最终目标产物
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