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2.2 实验方法
2.2.1 样品的制备
挑选颗粒饱满，无病害和残缺的一定量杂粮种子(红小豆、绿豆、花生仁、糜子)，清水冲洗2-3遍。洗净豆芽机，把杂粮种子均匀播洒于豆芽机的白色托盘上，灌好适量的水，温度设定为“高温模式”， 开始发芽，两天换一次水，分别在第3天(70h)、第6天(140h)和第12天(288h)培养萌发后，定时随机抓取一定数量的杂粮种子，进行各项实验数据的测定。
2.2.2 含水量的测定
以直接干燥法测定水分含量。测定方法：取玻璃制的扁形称量瓶，置于101 ℃-105 ℃干燥箱中，瓶盖斜支于瓶边，干燥1.0 h，置冷却器内冷却0.5 h，取出盖好，称量，并重复干燥至前后两次质量差不超过2 mg，即为恒重。将已经切碎的种芽样品，放入称量瓶中，加盖，精密称量后，置101 ℃-105 ℃干燥箱中，瓶盖斜支于瓶边，干燥2 h-4 h后，放入冷却器内冷却0.5 h，取出盖好，称量。然后再放入101 ℃-105 ℃干燥箱中干燥1 h左右，取出，放入冷却器内冷却0.5 h后再称量。并重复以上操作至前后两次质量差不超过2 mg，即为恒重。
试样中的水分含量按式进行计算：X = ×100% (2.1)
式中：X —— 试样中水分的含量，单位为克每百克(%)；
m1 —— 称量瓶和试样的质量，单位为克(g)；
m2 —— 称量瓶和试样干燥后的质量，单位为克(g)；
m3 —— 称量瓶的质量，单位为克(g)。
2.2.3 发芽率及发芽势的测定
固定温度设定为“高温模式”，浸泡时间为0小时，分别在杂粮种子第3天(70h)、第6天(140h)和第12天(288h)培养萌发后，定时随机抓取一定数量的种子，统计其发芽率。拉直芽根，用尺测其长度，记录数据，计算平均芽根长，最后根据发芽天数，计算发芽势。
发芽率 = ×100% (2.2)
发芽势(cm/h) = ×100% (2.3)
2.2.4 黄酮含量的测定
以紫外线分光光度法测定黄酮含量[29]。
(1) 做标准曲线
称量13.2mg芦丁，用无水乙醇定容到25mL容量瓶作为标准溶液。
表2-1 试剂添加顺序及添加量
试剂 加入量/mL
芦丁标准溶液 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 于10mL容量瓶
无水乙醇 2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0
5%亚硝酸钠 0.5 放置6min
10%硝酸铝 0.5 放置6min
4%氢氧化钠 4.0
加无水乙醇定容，摇匀后放置15min
在510nm处(扫描找到最大吸收)测定吸光度。用无水乙醇作为参比溶液，用芦丁含量的浓度作为横坐标，纵坐标作为一定浓度下所对应的吸光度，作标准曲线。
(2) 样品测定
用研钵把发芽的样品磨成匀浆，称取一定量种芽，加入60mL无水乙醇放于100mL圆底烧瓶内，置于水浴锅上，85℃条件下回流提取60min。过滤，无水乙醇定容于100mL容量瓶。吸取样品量1.0mL，放入10mL容量瓶内(写明标记)，用无水乙醇加到2.0mL；加入5%亚硝酸钠溶液0.5mL摇匀，放置6min；加入10%硝酸铝溶液0.5mL，放置6min后；加入4%氢氧化钠溶液4.0mL，摇匀后，加无水乙醇定容，放置15min；在510nm处测定吸光度，用无水乙醇作为参比溶液。