1.1实验条件。
1.1.1试验用斑马鱼的基本条件:试验鱼应无明显的疾病和畸形,试验鱼试验前一周内不 应对其做疾病处理,试验鱼试验前一天停止喂饲,试验鱼宜选择体长相似、健康且个体差异不大且同一鱼群的斑马鱼。试验鱼试验前应在与试验时相同的环境条件下饲养养3周。
1.1.2配制受试溶液应选在实验当天,水溶性受试物可溶于一定体积的标准稀释水、或蒸馏水中;水中溶解度较低受试物,可选择适当加热的方法;非水溶性的受试物,可使用少量对鱼低毒的有机溶剂助溶后再使用标准稀释水配置成溶液。
1.1.3饲养实验用鱼应选择相同体积的玻璃鱼缸,使用前应清洗干净并装满纯净水浸泡两天,在实验开始之前需要将之前浸泡用的纯净水倒去,并加入新配制的标准稀释水(斑马鱼在繁殖期所需pH 为 6.5-7.5,温度为 23±1℃,硬度为 250㎎/L 左右), 同时注意曝气程度以保证溶氧浓度在合适的范围内。标准稀释水中溶解氧应不少于 4mg/L。
1.2实验试剂
E3培养液(1L)(对照组):氯化钠(NaCl)17.2g,氯化钾(KCl)0.76g,二水合氯化钾2.91g,七水合氯化镁4.9g。
DMSO:二甲亚砜,一种透明、无色、无臭、呈微苦的液体,毒性极低,可溶解一般有机溶剂。
苯:在相应的实验组中配制成为不同的浓度,本实验设计了四组不同浓度梯度的对照。
PH测试剂:斑马鱼的饲养需要对PH值进行较为严格的控制,繁殖时用水要求pH6.5-7.5。
1.3实验仪器
水银温度计(用于严格控制水温),盐度计(检测水PH值),共聚焦显微镜(用于观察斑马鱼神经系统的损伤情况),摄影机(用于记录斑马鱼得到行为变化),多孔板,震动切片仪,Image J 程序等。