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摘要共轭亚油酸（Conjugated linoleic acid，CLA）是具有共轭双键的十八碳二烯酸的统称，由于其多样的生理活性而受到广泛关注，然而它的来源十分有限[1]。为了满足 CLA 在医药领域和营养领域的应用需求，通过生物技术生产单一、安全的 CLA 活性异构单体成为 CLA 合成技术的发展趋势。本研究所使用的质粒是pET24a,通过将含有经密码子优化后的痤疮丙酸杆菌亚油酸异构酶 PAI 基因的重组载体PET-24a-PAI转入到大肠杆菌的感受态细胞中，构建重组菌株BL21(DE3)- pET24a-pai，利用IPTG进行诱导表达，使重组菌发酵产出亚油酸异构酶，离心纯化后提取该酶进行SDS-PAGE凝胶电泳的实验，验证亚油酸异构酶基因在大肠杆菌中得到表达，并通过气相质谱联用对重组蛋白的酶活性进行检测。48277
Abstract Conjugated linoleic acid (CLA) is a mixture of positionaland geometric isomers of linoleic acid,with conjugated double bonds.CLA has multiple functions, such as anti-cancer, anti-aging, strengthening thebody immunity and other important roles.In this study,Propionibacterium acneslinoleic acid isomerase(PAI)gene was expressed inE. coli BL21 (DE3). The PAI gene was synthesized according to NCBI (Sequence number AX062088),andthe recombinant plasmidpET24a-pai was transformed into competent cell of E. coli BL21 (DE3). The PAI was successfully expressed by the recombinant stain BL21 (DE3) - pET24a-pai
毕业论文关键词： 共轭亚油酸、亚油酸异构酶
Key words: CLA、PAI
目录
致谢 2
摘要 3
目录 4
第一章 绪论 5
1.1 概述 5
1.2 共轭亚油酸的主要生理功能 6
1.1.1 抗肿瘤功能 6
1.2.2 减少脂质积累功能 6
1.3 共轭亚油酸的合成机理 7
1.3.1 CLA的化学合成法 7
1.3.2 CLA的生物合成法 7
1.5 本课题的立题意义与研究内容 8
第二章 亚油酸异构酶 PAI 基因的异源表达 . 8
2.1 实验材料 9
2.1.1 质粒和菌株 9
2.1.2 培养基和相关溶液 9
2.1.3 实验试剂 10
2.1.4 实验仪器 10
2.2 实验方法 12
2.2.1 共轭亚油酸异构酶基因的获得 12
2.2.2构建工程菌pET24a-PAI/E. coli BL21(DE3)和 pET22b-PAI/E. coli BL21(DE3) 12
2.2.3 含有 PAI 基因重组菌株的诱导表达和重组亚油酸异构酶获取 12
2.2.4 Ni+柱纯化重组蛋白 13
2.2.5 SDS-PAGE 凝胶电泳实验 13
2.2.6 定性实验—底物是由重组酶转移催化生成共轭亚油酸 13
2.2.7 脂肪酸的提取及检测分析 14
2.2.8 GC检测重组酶活力