西兰花上海青白萝卜砀山梨四种果蔬提取物的抗氧化活性研究(2)

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含多种维生素和氨基酸的白萝卜，是我国原产的重要蔬菜[6]。谚语有云：“冬吃萝卜，夏吃姜”。白萝卜是十字花科萝卜属植物，作为根茎类蔬菜，其具有下气消食、除疾润肺等功效，还能够治疗便秘、消化不良等疾病[7]。白萝卜中含有丰富的维生素、碳水化合物、矿物质胡萝卜素等。长期食用可预防动脉硬化及老化，还能有效抑制癌症。维生素、胡萝卜素、矿物质的含量都能体现其抗氧化活性。

出产于我国砀山县的砀山梨以其酥脆可口、果实硕大等特点深受消费者喜爱。砀山梨有祛热消暑、化痰润肺等功能。“果中甘露子，药中圣醍醐”便是我国中医对其的赞誉，并且《本草纲目》中也记载砀山梨“生食可清六腑之热，熟食可滋五脏之阴”。砀山梨富含氨基酸、维生素、矿物质等，其中维生素、矿物质等都具有较强的抗氧化活性。

本实验分别以无菌水、乙醇、50%乙醇、丙酮、50%丙酮为溶剂提取西兰花、上海青、白萝卜、砀山梨的抗氧化活性物质，采用DPPH·法考察四种果蔬提取物抗氧化成分清除自由基的能力，初步判断各种蔬果的抗氧化活性。

2 材料与方法

2.1 材料

新鲜西兰花、上海青、白萝卜、砀山梨，采购自王营菜市场

2.2 试剂

无水乙醇（分析纯）南京化学试剂有限公司；丙酮（分析纯）无锡市亚盛化工有限公司；甲醇（分析纯）上海久亿化学试剂有限公司；无菌水（实验室制备）。

DPPH（1,1-二苯-2-苦肼基），日本TCI公司。

2.3 主要设备仪器

电子天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司；DHG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱，上海精宏实验设备有限公司；旋片式真空泵，台州市南岗真空机械制造厂；FDV超微粉碎机，北京环亚天元机械技术有限公司；KQ-500E超声波清洗机，昆山市超声仪器有限公司；SHB-III循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司；RE-3000旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂；低温冷却循环泵，郑州长城科工贸有限公司；Centrifuge 5810R台式高速冷冻离心机，德国Eppendorf公司；infinite M200pro多功能酶标仪，瑞士Tecan公司。

2.4 实验方法

2.4.1 样品预处理

分别将采购的西兰花、上海青、白萝卜、砀山梨用清水清洗干净，切片后包好，置于-20℃的冷冻室冷冻。3天后取出，在超低温冷冻干燥机中冷冻干燥。待干燥完全后分别将西兰花、上海青、白萝卜、砀山梨用粉碎机粉碎，保存于真空干燥箱中备用。

2.4.2 DPPH溶液的配备

准确称取4.97 mg DPPH，在100 ml棕色容量瓶中用甲醇溶液定容至刻度线，配成0.1 mM DPPH溶液，密封，低温冷藏避免阳光直接照射备用。

2.4.3 样品溶液的制备

从干燥箱中取出处理后的样品，分别称量，以1:40的固液比提取西兰花、上海青、白萝卜、砀山梨样品。其中，用50%丙酮与丙酮为提取液的样品液在常温下超声1 h，用水、乙醇和50%乙醇提取的样品液在60℃下超声1 h。抽滤后将滤液倒入以标记称量的洁净鸡心瓶中，于旋转蒸发器上蒸干浓缩，然后放于真空干燥箱中干燥完全。每个实验重复3个，取平均值。

2.4.4 提取物溶液的配制

精确称量干燥后的提取物，配制成浓度范围为1 mg/ml ~ 23 mg/ml的提取物溶液。按不同浓度梯度稀释5个梯度，进行抗氧化活性测定。

2.4.5 抗氧化性的测定

DPPH(1,1-dipheny1-2-picrylhydrazyl)作为一种稳定的自由基在有机溶剂中呈紫色，并且在517 nm处有强吸收[8,9]。自由基的清除情况可以用其在517 nm波长处的吸收情况检测出来，进而评价实验样品的抗氧化活性[10,11]。取待测溶液10 μL于96孔板中，在加入190 μL 0.1 mM DPPH·甲醇溶液，同时以溶剂替代试样作空白对照，混匀，于暗处反应30 min，然后在517 nm处测吸光度值。DPPH自由基清除率计算公式如下。