1.2 方法

1.2.1 材料预处理

毛豆荚自然晒干粉碎，过40目筛，密封-80℃保存。

1.2.2 标准曲线绘制

将大豆皂苷类似物齐墩果酸为标准品溶于甲醇，其标准液质量浓度为0.1mg/mL，采用香草醛- 高氯酸- 冰乙酸法确定皂甙的吸光度[8]。准确吸取标准储备液l . 0mL 加入试管，水浴挥干溶剂，加5g/100mL 香草醛- 冰乙酸溶液0.2mL、高氯酸0 . 8mL，加塞、混匀，于70 ℃恒温水浴中加热15min，而后冰温冷却至室温，加乙酸乙酯4mL，摇匀，静置30min。以试剂作空白于200～760nm 波长范围内进行可见- 紫外扫描，以确定其最大吸收波长。精密吸取上述标准液0 . 2 5 、0 . 5 0 、0 . 7 5 、1、1.25mL 于试管中，挥干溶剂，以香草醛- 高氯酸- 冰乙酸混合溶液为空白对照，于最大吸收波长处测定其吸光度A，以质量浓度X 为横坐标、A 值为纵坐标绘制标准曲线,得到回归方程[9]。文献综述

1.2.3 毛豆荚总皂苷的提取

称取一定量的干燥毛豆荚粉末，放入磨口圆底烧瓶中，按照一定液固比加入乙醇溶剂，混合摇匀，于设定功率的微波萃取仪中萃取一定时间，取出容器，冷却至室温，减压抽滤，得到毛豆荚皂苷的乙醇溶液，进一步减压浓缩，蒸去乙醇，冷却至室温待用。将上述液体移入分液漏斗中，加水饱和正丁醇溶液（将蒸馏水与正丁醇溶液1:1混匀，超声10min，静置分层，上层即为水饱和的正丁醇溶液）15mL 进行萃取分离，重复萃取3次，合并正丁醇相。再用氨溶液（40mL浓氨水加蒸馏时配成100mL)洗涤两次，每次20mL。减压浓缩回收至干，即得毛豆荚皂苷固体颗粒，用甲醇溶解定容至5mL，静置待用。

1.2.4 毛豆荚总皂甙的测定与计算方法

移取1.2.2 节中定容后的甲醇溶液1mL 于试管中，挥发溶剂，按香草醛- 高氯酸- 冰乙酸法进行显色反应，以香草醛- 高氯酸- 冰乙酸试剂作空白对照，测定吸光度，毛豆荚中总皂甙的计算方法[19]。    

式中：x 为毛豆荚总皂苷含量 (μg/ g )；A 为吸光度；m 为毛豆荚干粉的质量/g ；a 为皂甙标准曲线的系数；b为皂甙标准曲线的常数项；V 为样品定容的体积/mL；n 为稀释倍数。

1.2.5 单因素试验

1.2.5.1 提取温度

称取毛豆荚粉末4.00g，按料液比1:20g/ml加入浓度为60%的乙醇水溶液，微波功率设置为600w，在15℃、30℃、45℃、60℃、75℃下提取30min，抽滤，收集滤液，旋转蒸发浓缩，用水饱和正丁醇溶液和氨溶液进行分液萃取，再旋转蒸发至干，最后用分光光度法测定皂苷含量。

1.2.5.2 料液比

称取毛豆荚粉末4.00g，按料液比（g/ml）1:5、1:10、1:20、1:30、1:40加入浓度为60%的乙醇水溶液，微波功率设置为600w，在60℃下提取30min，抽滤，收集滤液，旋转蒸发浓缩，用水饱和正丁醇溶液和氨溶液进行分液萃取，再旋转蒸发至干，最后用分光光度法测定皂苷含量。

1.2.5.3 乙醇体积分数

称取毛豆荚粉末4.00g，按料液比1:20g/ml加入浓度为20%、40%、60%、80%、100%的乙醇水溶液，微波功率均设置为600w，60℃下提取30min，抽滤，收集滤液，旋转蒸发浓缩，用水饱和正丁醇溶液和氨溶液进行分液萃取，再旋转蒸发至干，最后用分光光度法测定皂苷含量。来,自|优;尔`论^文/网www.youerw.com

1.2.5.4 微波时间