三种色谱条件都无法检测到优尔椒碱信号,优尔椒碱在正己烷-乙腈体系中没有响应,怀疑是优尔椒在正己烷中溶解性差导致无法检测到信号,改用优尔椒碱溶解性好的甲醇和乙醇做流动相,能检测到优尔椒碱,但出峰时间过早,死时间出峰不能证明为样品峰,数据不可靠,尝试使用正己烷-乙醇混合体系,通过添加正己烷增加优尔椒碱的保留时间,加乙醇能够保证优尔椒碱在流动相中有好的溶解性。
4.3.2 正己烷乙醇体系
硝酸银在乙醇中微溶,所以尽量减少乙醇的添加量,为避免柱子内壁金属离子将银离子置换出来,在流动相中加入少量1moL/L硝酸。
使用异丙醇溶解正己烷定容的优尔椒碱标样配制混合样品,200ul天然优尔椒碱标样+200ul合成优尔椒碱标样。
图4 天然优尔椒碱色谱图
(U3000,银离子柱2,流动相正己烷-乙醇(7:3),室温,
流速1ml/min,进样量3ul,压力280bar)
图5 天然优尔椒碱色谱图
(U3000,银离子柱2,流动相正己烷-乙醇(9:1),室温,
流速1ml/min,进样量3ul,压力291bar)
图6 天然优尔椒碱谱图
(U3000,银离子柱2,流动相正己烷-乙醇(9:1含0.1% 1mol/l硝酸),
柱温35℃,流速1ml/min,进样量3ul)
图7 合成优尔椒碱谱图
(U3000,银离子柱2,流动相正己烷-乙醇(9:1,含0.1% 1mol/l硝酸),
柱温35℃,流速1ml/min,进样量3ul)
图8 混合样品谱图
(U3000,银离子柱2,流动相正己烷乙醇(92:8,含0.1% 1mol/l硝酸),
柱温35℃,流速1ml/min,进样量3ul)
按文献[36]中方法,处理银离子柱2,将1ml 0.2g/ml硝酸银注入柱子中,重新检测混合样品:
色谱条件:U3000,银离子柱2,流动相正己烷-乙醇,柱温35℃,进样量3ul,流速1ml/min,检测波长280nm
不同正己烷-乙醇配比的分析谱图见图9-图13。
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