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神经前体细胞的不对称分裂及后续的细胞命运决定，可以通过不对称分裂过程中的一些不对称特性来达成，如胞内细胞命运决定子的不对称分配，或者将子细胞不对称地置于不同的外部微环境等，涉及到胞内及胞外诸多因素[18]。其机制可以从转录、表观调控，信号通路[19-20]等多个角度探讨。大多研究着重于细胞极性确立、纺锤体定位、细胞组分（如极性蛋白）和细胞命运决定因子的不对称分配等[21-22]。例如，在脊椎动物脑发育过程中，放射状胶质细胞早期分裂是对称分裂，分裂面与脑室表面垂直，此时纺锤体方向水平[23]。之后对称分裂的放射状胶质细胞，通过Insc蛋白与极性蛋白的相互作用将LGN复合体定位到细胞顶部，调控了纺锤体方向，从而诱导了水平分裂面的出现，出现不对称分裂。26811
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针对视网膜发育，大量研究表明，视网膜前体细胞进行不对称分裂形成7类视网膜细胞这一过程中，外部因素和内在因素均参与RPCs子代细胞的命运决定。其中，胞外因素有Shh、Notch/Delta等信号通路、甲状腺激素等。例如，连续激活的Notch信号 以及上升的Dll 信号能够抑制RPCs向神经元分化，而抑制Notch信号通路则具有相反的效应。另外，Notch信号能够促进Müller胶质细胞分化，但会抑制光感细胞的分化命运[2]。诚然外部因素对RPCs不对称分裂及子代命运决定很重要，但近些年研究提示，内在因素如重要转录因子的表达等等，很可能才是RPCs不对称分裂及命运决定的首要因素[2] [24-26]。论文网
由上述可知，以往的不对称分裂调控及细胞命运决定的研究往往集中在细胞极性确立、纺锤体定位、细胞组分（如极性蛋白）的不对称分配等，而很少从等位基因位点的角度入手，去看重要转录因子在等位基因位点上转录活动的不同，及其与细胞命运决定之间有无重要关联。
同样，以往对ath5转录活性与RGCs分化的关系基本都是基于突变体看表型，或者看过表达之后的现象对RGCs数量的影响，而没有从单个ath5等位基因位点的视角去看当视网膜前体细胞RPCs进行不对称分裂过程中复制产生的两套子代姐妹染色体上的转录激活是否存在不对称性，而如果存在，这种不对称性是否会与之后的RGCs细胞命运发生关联。
鉴于活体状态下检测单个细胞中单基因的转录活动此类技术仍不成熟，处于领域前沿中需要攻克的难题，本课题拟通过原位杂交的技术建立优化的DNA-FISH和RNA-FISH结合的实验方案，来实现对斑马鱼发育中的视网膜组织进行DNA和RNA水平的原位杂交，进而实现单细胞水平对单个ath5等位基因的转录活动进行检测。从而获得信息，探究单个细胞ath5不同等位基因位点之间是否真实存在着ath5转录活动的不对称性，以及该不对称性是否存在着与RGC分化命运决定的关联。