小分子化合物作为拮抗剂的筛选及其在肠道炎症性疾病中的应用(5)

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分节丝状菌（SFB），是在小鼠肠道中发现的一种共生菌群。SFB在感应CD4+ T 细胞中的维甲酸相关孤核受体家族中的RORγt的表达有重要作用，由此促进体内T辅助17细胞细胞的分化，尤其是在小肠当中。缺乏分节丝状菌的小鼠表现出小肠T辅助17细胞细胞的大量减少，而有SFB的单克隆无菌小鼠可以恢复肠道T辅助17细胞细胞数量。而最近有研究发现，3型天然淋巴细胞可以通过分泌IL-22抑制肠道SFB的扩增，从而抑制T细胞尤其是T辅助17细胞细胞介导的自身免疫反应。

1.4小分子拮抗剂的简介

1.4.1维甲酸相关孤核受体家族中的RORγt拮抗剂的作用

一些小分子化合物可作为维甲酸相关孤核受体家族中的RORγt拮抗剂，抑制维甲酸相关孤核受体家族中的RORγt在相关细胞中的表达，从而影响相关细胞分化及其细胞因子表达。维甲酸相关孤核受体家族中的RORγt拮抗剂包括内源性拮抗剂及外源性拮抗剂，内源性维甲酸相关孤核受体家族中的RORγt拮抗剂目前未见报道，本课题即研究外源添加的维甲酸相关孤核受体家族中的RORγt拮抗剂。维甲酸相关孤核受体家族中的RORγt拮抗剂可以竞争性或非竞争性的结合到维甲酸相关孤核受体家族中的RORγt配体结合结构域上（维甲酸相关孤核受体家族中的RORγt LBD），导致维甲酸相关孤核受体家族中的RORγt构象发生变化，从而调控相关细胞的转录活性。维甲酸相关孤核受体家族中的RORγt拮抗剂多表现出剂量依赖性。

在肠道炎症性疾病中，T辅助17细胞和3型天然淋巴细胞都发挥着重要作用，通常情况下，T辅助17细胞及其分泌产物在肠道炎症性疾病中表达致炎作用，而ILCs及其表达产物在肠道炎症性疾病中是否有致炎作用尚未明确。有研究表明，ILCs对于抑制SFB扩增及T辅助17细胞细胞增殖有重要作用，从而抑制自发性结肠炎。ILCs与T辅助17细胞细胞在肠道炎症性疾病中的相互作用机制尚未明确。T辅助17细胞细胞与3型天然淋巴细胞拥有共同的转录调控因子维甲酸相关孤核受体家族中的RORγt，故维甲酸相关孤核受体家族中的RORγt拮抗剂可能对T辅助17细胞及3型天然淋巴细胞的增殖分化及细胞因子分泌均产生一定的影响。

目前研究主要集中在维甲酸相关孤核受体家族中的RORγt拮抗剂对于T辅助17细胞细胞的增殖分化以及对于IL-17及IFN-γ分泌的影响。研究发现，特定的小分子化合物在一定剂量范围内可以结合到T辅助17细胞细胞的维甲酸相关孤核受体家族中的RORγt配体结合结构域上，抑制了维甲酸相关孤核受体家族中的RORγt的转录作用，从而抑制了T辅助17细胞的分化及致炎细胞因子IL-17的表达，可能为炎症性肠道疾病提供一个治疗靶向。本实验参考特定的维甲酸相关孤核受体家族中的RORγt拮抗剂作用于T辅助17细胞细胞时所表达的影响，着重研究该拮抗剂对于3型天然淋巴细胞功能的影响。

1.4.2维甲酸相关孤核受体家族中的RORγt拮抗剂研究进展

R.Huh等[12]研究发现，强心苷地高辛是维甲酸相关孤核受体家族中的RORγt转录活性的特异性抑制剂。地高辛可以抑制小鼠T辅助17细胞细胞的分化，而不影响其他类型的T细胞。地高辛可以有效延缓小鼠自身免疫疾病的发作或减轻其严重性。地高辛对于小鼠T辅助17细胞细胞的影响表现出剂量依赖性，实验中当添加的地高辛浓度为10mM时，可以选择性地抑制RORg依赖的转录活性而不影响RORα、DHR3或VP16；高浓度添加（超过100nM）时，地高辛表现出细胞毒性，因为它会影响钠－钾ATP酶。研究还发现，地高辛的无毒合成衍生物：20,22－二氢地高辛-21,23-二醇以及地高辛-21-亚水杨基特异性地抑制人类CD4+ T细胞中的IL-17的产生。该研究表明地高辛衍生物可作为维甲酸相关孤核受体家族中的RORγt靶向治疗药物开发的化学模版来削弱炎性淋巴细胞功能及自发性免疫疾病。