3.2.6 精密度 14
4 结果与讨论 16
4.1 紫外扫描确定最适检测波长 16
4.2 优化影响显色反应的条件 16
4.2.1 N,N'-二环己基碳二亚胺浓度对显色反应吸光度的影响 16
4.2.2 盐酸羟胺浓度对显色反应吸光度的影响 17
4.2.3 氯化铁浓度对显色反应吸光度的影响 18
4.2.4 反应时间对显色反应吸光度的影响 18
4.2.6 水浴时间对显色反应吸光度的影响 19
4.3 试验的抗干扰性测定 20
4.3.1 盐酸浓度对显色反应吸光度的影响 20
4.3.2 DMSO浓度对显色反应吸光度的影响 20
4.4 标准曲线的绘制 21
4.5 加标回收率 22
4.6 精密度 22
4.7 腈水解酶活性的测定 23
5 总结与展望 24
致谢 26
参考文献 27
1 研究背景
1.1 生物催化
1.1.1 生物催化简介
生物催化是指利用酶或者生物有机体(细胞、细胞器、组织等)作为催化剂进行化学转化的过程,这种反应过程又称为生物转化。生物催化中常用的有机体主要是微生物,其本质是利用微生物细胞内的酶进行催化,促进生物转化的进程。
生物催化过程不同于传统的化学过程,主要是由于技术条件下的酶催化功能和动力学,蛋白质的稳定性从他们的作用,在细胞的生理,如生长,酶活性诱导或代谢途径的多步反应使用,派生。在实验室中,新的生物催化反应常常是源于新的酶活动[1]。
生物催化与生物转化是生物学、化学、过程工程科学的交叉领域。其核心目标是大规模采用微生物或酶为催化剂生产化学品、医药、能源、材料等。生物催化与生物转化是与生命和人类活动关系最为密切的自然规律之一。近年来,随着基因组学、蛋白质组学等生物技术的飞速发展,大大地推动了生物催化与生物转化的基础研究和应用研究。人们普遍认为生物催化与生物转化将是生物技术革命的第三次浪潮。世界经合组织提出:“生物催化技术是工业可持续发展最有希望的技术”[2]。
1.1.2 生物催化的优缺点
生物催化作用条件温和,基本上在常温、中性、水等环境中就可以完成;由于催化过程中的酶具有专一性,因此生物催化具有独特、高效的底物选择性;并且生物催化对于手性活性药物成分的合成具有独特的优点。
但生物催化也同样存在一些缺点,比如在反应介质中,生物催化剂不够稳定,酶构象仅发生0.1nm的变化,活性急剧下降;能够催化一个特定的目标反应高效进行的生物催化剂不多,大多数生物催化剂要么不清楚其特性,要么具有专利保护;生物催化剂的发现与改良周期太长,一些有代表性的生物催化加工用了10-20年的时间才得以实现。
1.2 生物催化剂
1.2.1 生物催化剂简介
生物催化剂是指生物反应过程中起催化作用的游离或固定化细胞各游离或固定化酶的总称。两者的实质都是酶,但前者酶保留在细胞中,后者酶则已从细胞中分离纯化。对于需要利用一种以上的酶和辅酶的复杂反应或酶不能游离使用的反应,通常采用全细胞的生物转化,否则为了简单起见则选择游离酶。
与非生物催化剂相比,生物催化剂具有能在常温常压下反应,反应速率快,催化作用专一,价格较低等优点,但缺点是易受热、受某些化学物质及杂菌的破坏而失活,稳定性较差,反应时的温度和pH范围要求较高。
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