致谢 17

1 绪论

连云港海岸带土壤属于盐碱地，盐碱地（Saline alkali land）是指表层含盐碱成分且其所含有的盐分会严重影响到作物正常生长的土地[1]。据国家教科文组织和粮农组织不完全统计，全世界盐碱地总面积为9.5438亿公顷，而中国占有的为9913万公顷，约占全世界的10%[2]。盐碱地一般分布在地势低平，排水不通畅地区及比较干旱的地区，其形成的原因有两种：第一种，在干旱地区，蒸发量太大，土壤中水分会大量流失，从而导致铅盐积累；第二种是地下水水位高，地下水上升到地表，导致盐分的大量累积。在我国，盐碱地主要分布于淮河以北、青藏高原、西北和新疆等内陆干旱、半干旱地区[3]。盐碱地会严重制约该地区农作物的自然生长，也会制约该地区的经济发展。但是盐碱土地中含有大量具有特殊代谢机制的耐盐碱植物及微生物，在漫长的进化过程中，为了特定的适应环境需要，它们自身形成了非常特别的生理机制并且同时会产生一些有用的代谢产物，而这些生物资源的开发利用具有巨大的潜在价值。在当今社会，食品，化妆品，药品等行业的发展离不开微生物行业的发展，而人们对传统微生物的日益完善了解让人们日益意识到对极端微生物进行研究的重要性。嗜盐微生物是极端微生物的重要组成部分，对它的研究具有很大的应用前景。长期以来，在嗜盐菌的研究工作中，人们青睐于研究嗜盐古菌和嗜盐细菌，而对嗜盐放线菌的研究报道并不多见。嗜盐微生物在食品加工、医疗保健、化妆品、农产品等各个方面有着广泛的利用价值[4]，放线菌作为酶制剂及抗生素的重要来源[5]，正日益受到各国微生物研究者的关注。土壤中的放线菌拥有巨大的应用价值，在土壤有机质分解和腐殖质形成过程中，它们具有不可替代的作用，所以它们的种类、数量和土壤肥力有着很密切的联系，标志着土壤的肥力高低[6]。在自然环境中，极端微生物存在的数量较少，所以用常规的方法不易将它们分离出来，本实验的创新点在于尽可能多的减少或消除高盐环境中混合有的杂菌的影响，用适量的抑制剂抑制真菌和细菌的生长，塑造适合嗜盐放线菌生长的环境，从而尽可能多的分离出放线菌菌种。利用纯培养法对连云港市海岸带土壤中的放线菌的多样性进行了探讨，并对它们进行酪蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、几丁质酶的酶活性大小测定以及对它们解磷能力大小进行测试，从而探索这些放线菌产酶的潜力。研究结果表明，连云港海岸带土壤放线菌资源具有巨大的开发潜力。该研究不仅为开发盐碱地稀有放线菌提供了理论依据，而且也为有助于人类对于极端微生物资源的利用和保护。论文网

2材料与方法

2.1供试材料

2.1.1样品来源

从连云港海岸带土壤中采集到7份土样，放在4℃冰箱中备用。

2.1.2培养基

分离培养基：（1）淀粉-酪素培养基：葡萄糖 5.0g，CaCO3 2.0g，可溶性淀粉 5.0g，酵母膏 1.0g，水解干酪素 2.0g，琼脂 20g，H2O 1L。（2）甘油-天门冬酰胺培养基（ISP 5）：K2HPO4 1.0g，天冬酰胺 1.0g，甘油 10.0g，琼脂 20g，H2O 1L。（3）海藻糖-脯氨酸培养基：海藻糖 2.0g，KNO3 0.5g，脯氨酸 1.0g，Na2HPO4 0.3g，CaCl2 0.5g，MgSO4 0.2g，琼脂 20g，H2O 1L。（4）丙酸钠-脯氨酸培养基：丙酸钠 2.0g，KCl 0.1g，脯氨酸 1.0g，CaCl2 0.5g，K2HPO4 1.0g，琼脂 20g，H2O 1L。（5）淀粉-精氨酸培养基：可溶性淀粉 2.0g，K2HPO4 0.5g，精氨酸 1.0g，MgSO4 0.5g，FeSO4 0.01g，KNO3 1.0g，NaCl 3.0g，琼脂 20g，H2O 1L。将以上培养基121℃灭菌并将其pH值调至7.2。为了抑制细菌和真菌的生长，故往其中加入抑制剂：制霉菌素50mg/L和萘啶酮酸30mg/L[7]。因为土样取自海岸带，考虑到土样自身的含盐量，为了有效分离出更多放线菌，根据前期的条件摸索，每种培养基中均加入3%的海盐。