表3-1 内生真菌的分离与纯化 9

表3-2 内生真菌对四种菌的抑菌率 10

一 绪论

随着抗生素类药物的广泛滥用，细菌耐药性的问题越来越严重，尤其是细菌多重耐药菌的问题。近年来，“超级细菌”不断增长的问题遍布世界，这一现象给医疗保健机构带来极大的威胁与挑战。其中，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐万古霉素肠球菌、产超广谱β-内酰胺酶细菌、耐碳青酶烯类抗菌药物肠杆菌科细菌、耐碳青酶烯类抗菌药物鲍曼不动杆菌、耐万古霉素金黄色葡萄球菌、多重耐药/泛耐药铜绿假单胞菌、多重耐药/泛耐药鲍曼不动杆菌和难辨梭状芽孢杆菌等已经成为医院感染最主要的致病菌[1-3] 。耐药菌给人力和社会造成的花费占相当大的数目，同时给医疗保健人员无形中增加了很大的压力，给患者及其家属也同时带来恐慌和精神及经济的压力，导致了病人需要治疗的时间增长也就是住院时间的增长，会导致治疗费用的增加，死亡率也随之升高。由此可见，当前急需研发出新型的抗生素来应对耐药菌所带来的极大侵害。论文网

内生真菌(endophytic fungi)指那些生活在健康的植物组织内却又不会引起植物产生明显病症的一类真菌。几乎所有的植物都有内生真菌，保守估计大概有1500000种。[4,5]近二十年来，人们开始关注内生真菌，并进行了相应的研究。相比其它真菌类群的研究深度，目前我们对内生真菌的了解还停留在肤浅的阶段，研究所涉及的植物的种类数量仅仅只有数百种。从目前已经研究过的植物来看，每种植物都分离出了内生真菌。所以可推断出内生真菌在植物体内是普遍存在的。绝大多数的内生真菌是由子囊菌和其无性型组成，同时也包括了少数的担子菌与接合菌。内生真菌与宿主植物的共生关系是经历了漫长的进化过程后相互适应，这种共生关系以互惠互利为纽带。所以植物内生真菌代谢产物的类型是与其宿主植物有密不可分的关系[6,7]。

植物内生真菌是数量巨大的特殊真菌类群，根据Dreyfuss和Chapela的估计，约有一百万至数百万种的内生真菌存活于27至400万种微管植物的细胞内或细胞间隙这样一个特殊环境中[8,9]。研究表明内生真菌是产生新化合物的源泉，它可以产生出多种活性物质，包括抑菌、抗肿瘤、抗病毒、降血糖、抗菌、杀虫、免疫抑制、酶抑制剂或激活剂等等物质，这已经成为了微生物资源开发的热点之一。因为宿主植物的不同会导致其此生代谢产物也不同，为天然药物的研究提供丰富的潜在资源提供了有利条件[10]。南洋杉为乔木，不耐寒，忌干旱，冬季需充足阳光，原产大洋洲东南沿海地区，现在中国广东、福建、台湾、海南、云南等地露地栽培。到目前为止尚未见有关南洋杉内生真菌的研究报道。本研究分离并保藏南洋杉内生真菌并研究了其代谢产物的抑菌活性，为保护南洋杉内生真菌资源以及开发利用南洋杉内生真菌提供基础数据和理论依据。

二 材料与方法

2.1材料

2.1.1植物材料

植物样本于2015年11月采自福州国家森林公园。公园坐落于亚热带北部地区，为亚热带海洋性气候，雨量充沛，气候温和，年平均相对湿度较高，可达79%，年平均气温为20℃。选择10棵南洋杉，采集其健康的叶片和枝条，装袋后立即带回实验室，于2天内分离内生真菌。文献综述

2.1.2供试菌

大肠杆菌 （Escherichia coli）；枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）；金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA），上述菌种保存于江苏师范大学药用植物重点实验室。