摘要目的：本研究是通过利用姜黄素来处理人肝癌细胞株系：HepG2细胞,筛选出经处理后HepG2细胞内表达发生变化的基因。以便了解姜黄素诱导HepG2细胞凋亡在RNA水平上的凋亡机制，为日后的研究奠定基础。方法：用一定浓度的姜黄素，不同的时间梯度处理HepG2细胞和用不同的浓度梯度的姜黄素，在相同的时间长度里处理HepG2细胞。提取细胞的总RNA，最后以⬬¬-actin作为内标基因进行半定量RT-PCR筛选出经姜黄素处理后表达升高和降低的有关基因。结果：姜黄素确实可以有效的抑制癌细胞的增殖，并且与姜黄素处理癌细胞的时间和浓度有关。随着浓度或时间的变化有些基因的表达逐渐升高如BAX，还有些基因的表达逐渐下降如HSPA6。结论：姜黄素通过抑制或促进人肝癌HepG2细胞中的基因的表达使癌细胞凋亡。71252

Abstract Objectve:this study curcumin treated human hepatoma HepG2 cells,filter in expression HepG2 cells after they have been processed to change genes.To learn about curcumin induced apoptosis in HepG2 cells at the RNA level of apoptosis mechanism laying the foundation for future research.Methods:a certain concentration of curcumin ,different time gradient of HepG2 cells treated with different concentration gradients,a certain amount of time dealing with HepG2 cells.Extracting of total RNA,finally usingβ-actin as internal standard for semi-quantitative RT-PCRscreening of genes processed by curcumin expression and reduced the gene.Result:curcumin can effectively inhibit the proliferation of cancer cells,and cancer cells with curcumin time and concentration.Asthe time of concentration or increased expression of some genes such as BAX,and decreased expression of some genes such as HSPA6.conclution:curcumin in human hepatoma HepG2 cells by affecting gene expression of apoptosis in cancer cells.

毕业论文关键词：姜黄素; HepG2细胞; 半定量RT-PCR；基因筛选；Egr-1基因

Keywords：Curcumin;HepG2 cell; RT-PCR; Genetic screening; Egr-1

目录

1引言 4

2 实验材料 5

2.1 实验仪器 5

2.2 实验试剂 5

3 实验方法 5

3.1 HepG2细胞的复苏 5

3.2 HepG2细胞的培养 6

3.3 HepG2细胞的冻存 6

3.4 姜黄素处理HepG2细胞 7

3.5 提取总RNA 7

3.6 逆转录成cDNA 7

3.7 半定量RT-PCR 8

3.8 琼脂糖凝胶电泳检测 8

4.结果 8

4.1 20um/L姜黄素处理后半定量RT-PCR初步筛选结果 8

4.2 20um/L姜黄素处理不同时间后半定量RT-PCR筛选结果 9

4.3 不同浓度姜黄素处理3h后半定量RT-PCR分析Egr-1基因表达情况 10

5 结论 11

6参考文献 11

致谢 12

1引言

中国属于肝癌高发地区，根据世界卫生组织最新发布的《全球癌症报告2014》，可知，癌症的新增病例有一半的患者来自亚洲，大部分是出自于中国，中国的新增癌症病例的数量排在世界第一位。由全球肿瘤登记中心发布的《2012中国肿瘤登记年报》指出，中国的新增肿瘤病例每天约增加8550例，换而言之，每一分钟约有6个人被诊断为癌症，5个人因患癌症而死亡。影响全球发病率和死亡率的主要原因就是癌症，在2012年全世界大约有1400万新发癌症病例，预计未来20年新发病例数约增加70%。而在世界引起癌症死亡最常见的癌症类型中，肝癌以745万例的死亡数位居榜首。我国的肝癌诊治形势仍十分严峻。与其他多数癌症相比，肝癌是最难发现、最难诊断、最难治疗、发展最快、预后最差的，因此肝癌被视为“癌中之王”。目前临床上对于癌症的非手术治疗方法主要是通过放疗或化疗的方式，但是放化疗过程中患者很难受，副作用也很大。[1]因为在放化疗的过程中杀死的不仅是癌细胞，还有正常的细胞也会有损伤甚至被杀死。患者的生活质量也会大幅度的下降。论文网