3。6。2 具体步骤 ·· 10

  3。6。1 主要试剂 ·· 10

  3。6。2 实验仪器 ·· 11 

 3。7 细胞破碎 ·· 11

  3。7。1 实验原理 ·· 11

  3。7。2 具体步骤 ·· 12

  3。7。1 主要试剂 ·· 12

  3。7。2 实验仪器 ·· 12

 3。8 酶活力测定  12

  3。8。1 实验原理 ·· 13

  3。8。2 具体步骤 ·· 14

  3。8。1 主要试剂 ·· 14

  3。8。2 实验仪器 ·· 15

 3。9 气相色谱法  15

  3。9。1 实验原理 ·· 15

  3。9。2 具体步骤 ·· 15

  3。9。1 主要试剂 ·· 16

  3。9。2 实验仪器 ·· 16

4 实验结果和讨论 ·· 17

 4。1 重组质粒的转化及其鉴定  17

 4。2 16℃诱导 ·· 18

  4。2。1 蛋白质胶图  18

  4。2。2 酶活力测定  19

 4。3 25℃诱导 ·· 21

  4。3。1 蛋白质胶图· 21

  4。3。2 酶活力测定  ·· 23

 4。4 气相色谱 ·· 23

5 总结和展望  29

致谢 ·· 30

参考文献 · 31

1 研究背景

1。1基因工程

1。1。1 基因工程的定义

    基因工程是指在质粒、噬菌体等载体分子中插入目的基因，形成新的遗传物质，再将遗传物质导入到新的宿主细胞内，使其在宿主细胞内稳定、持续地表达，从而对目的基因的生物学特性进行研究。这些过程均在体外进行，因此与基因克隆的含义相近。

1。1。2 基因工程的流程

    基因工程的基本材料为DNA。其流程图如下：

第一步分离目的基因指的是获得原材料DNA中含目的基因的DNA片段或克隆子，可采用PCR技术，也可杂交分子来构建cDNA文库或基因组文库。

在重组克隆载体前，通常需要先将DNA片段用限制性内切核酸酶切割使其末端成为互补黏性末端或平末端以方便连接。连接所用的工具酶为DNA连接酶，它能有效地将克隆载体与DNA片段连接成为新的DNA分子，即重组DNA分子。此步为整套流程中的关键一步，故基因工程还有一个名称，叫作重组DNA技术。

转入不同类型的受体细胞需要不同的方法：导入原核生物细胞常用的方法有三亲本接合转化法、CaCl2处理的转化法和病毒颗粒感染的转导法等；导入动物细胞可采用病毒载体转导法和磷酸钙转染法等；导入植物细胞则采用微弹轰击法、Ti质粒载体转化法和花粉管通等[1]。

1。1。3 基因克隆的应用与展望

    随着基因工程技术的进步，人们越来越习惯于应用这些肉眼看不见的东西制造出人类所需的产品。高通量的基因芯片技术、长片段的DNA序列测定技术、以PCR为基础的差异筛选技术和生物信息技术等的大量涌现，基因工程的速度和规模急剧扩大，与此同时也加深了人类对自身和其他共存的生物的了解与认识。

基因工程主要应用在生物制药方面，常以生物组织、微生物或动物毒素为原材料，应用组织培养技术或克隆技术，对DNA按上述过程进行一系列加工。其产物具有生物活性，主要包括生物药物、疫苗和诊断试剂三大类，在预防、诊断疾病等方面都有应用。现如今，生物医药的发展主要集中于以下两方面：一是药物基因组学；二是生物制药技术平台包括基因组平台和生物芯片平台。