芦丁的药代动力学研究对于其药物的发现和开发及药物上市有着至关重要的意义[6]。为了探究肝脏对芦丁的代谢作用,本实验首先破坏小鼠的肝脏,因为考虑到腹腔注射速度较快,所以采用四氯化碳溶液给小鼠腹腔注射,建模24小时后给小鼠口服芦丁,再按不同时间点取小鼠血清,通过HPLC分析技术检测小鼠血清中芦丁原药的浓度,完成芦丁在小鼠体内的药代动力学分析。为了对照,可用相同的实验方法和药物浓度分别在正常小鼠体内、离体血液及生理盐水中进行了对照实验。通过结果对比得出肝脏的完整与否对芦丁代谢的影响。

1 材料与方法

1。1小鼠肝损伤模型的建立

1。1。1实验材料

    小白鼠若干只、20%CCl4、植物橄榄油、注射器、移液枪、去离子水、记号笔等。

1。1。2小鼠的选取

    选取体型相似,重量相进的雌雄小白鼠各三只,要求健康空腹24小时。

1。1。3试剂的配制

    根据所查文献可知,小鼠肝损伤建模每只小鼠腹腔注射的四氯化碳溶液体积为0。1 mL/10g,实验小鼠共6只,按每只小鼠30克计算,共需要大约1。8 mL四氯化碳溶液,浓度大约在0。2%~0。3%之间。

用20%CCl4配:(20%×V20%四氯化碳)&pide;(V20%四氯化碳+V橄榄油)=0。3%

                               即V橄榄油=(197&pide;3)×V20%四氯化碳

因此要取3 mL20%的四氯化碳加入197 mL的橄榄油中混匀,即得。

1。1。4实验方法

    ①经查文献确定小鼠肝损伤模型建立的CCl4的最佳染毒途径是灌胃,但所需时间较长。由于时间的限制,我们采用的是腹腔注射法剂量为0。3%,0。1 mL/10g、时间为24小时[7]。 

    ②取6只小鼠,雌雄各半,分两组,每组三只,用天平对每只小鼠进行称量并记录数据做成表格。对每只小鼠进行标号处理并在鼠笼上做上标记♂♀,用注射器吸取0。3%四氯化碳,刺入时针头要与腹腔呈45度且针头可活动。注射后继续观察小鼠24小时内是否有死亡,若有需要及时补充并重新建模。记录每只小鼠注射量。

1。2肝损伤小鼠芦丁灌胃给药文献综述

1。2。1实验材料

    曲克芦丁固体粉末、注射用生理盐水、灌胃针头、1。0 mL注射器、称量纸、玻璃棒、电子天平、量筒、移液枪

1。2。2配制试剂

    曲克芦丁药液:按每总小鼠重30克计算,每只老鼠要给药体积:6×(30&pide;10)×0。2=3。6 mL,因此可以配制5-10 mL,另外小鼠每天给药应该在10 ㎎/㎏(100 g/10 g),即相当于100 µg要溶解在0。2 ml中,因此药物配制浓度为:100 µg&pide;0。2 mL=0。5 ㎎/mL。因此,要配的药是浓度0。5 ㎎/mL总体积10 mL,即称取5 ㎎芦丁溶解在10 mL生理盐水中。

1。2。3实验方法

    建模后24小时用浓度为0。5 ㎎/mL芦丁灌胃(0。2 mL/10 g),针头从小鼠嘴的一侧进入,压住舌头,缓缓插入,插入时应有一种刺空感且针头可插入很深。灌胃完后继续观察是否有小鼠死亡,考虑到单次给药不能使药物浓度达到稳态(CSS),因此每天二次,连续三天,即总共要灌胃6次,记录下每只小鼠给药量,并制作表格。

1。3分多个时间点对小鼠眼球取血

1。3。1实验材料

    肝素钠注射液、弯头镊子、橡胶手套、离心管

1。3。2实验方法

    先取12个离心管(先用适量肝素作为抗凝剂润湿离心管),进行标号。分若干个时间点,以半个小时为一个间隔眼球取血。

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