性反转(sex reversal)是个体从一种性别特征转变为另一种性别特征的现象。性反转只是生殖腺及由此引起的表型性征的改变,而染色体组型是不改变的。根据定义可将性反转分为XX性反转(染色体型为XX,表型为雄性)和XY性反转(染色体型为XY,表型为雌性)两种类型[2]。在较低等动物如鱼、黄鳝和某些爬行动物,由于温度，激素等环境条件的改变而引起完全性反转,并有正常的繁殖能力[3-4]。性反转后的乌苏里拟鲿遗传性别不会改变，可通过性别特异性分子标记予以检测。雄激素诱导性反转的雄鱼存在生态风险，虽然养殖上不可取，但是可以探讨鱼类性别决定的机制和影响性别分化的因素，为鱼类性别控制育种提供理论基础和实验依据。本实验将使用经雄激素诱导的乌苏里拟鲿为材料，先分析其遗传性别，再观察其性腺结构，为优化性反转实验条件提供依据论文网

PCR（聚合酶链式反应）技术是一项发展迅猛的生物技术, 因具有快速、 灵敏、 简便及特异性强等特点而被广泛应用于性别鉴定及其它许多相关研究领域。PCR技术是通过引物延伸核酸的某个目标区域而重复进行双向 DNA合成。首先是双链 DNA 在高温作用下变性, 解链成单链, 随后退火, 这时两条引物分别与各自互补的 DNA杂交, 在 DNA 聚合酶作用下,利用反应体系中 4种 dNTP底物按照碱基互补原则将引物链沿 5’→3’方向延伸, 与模板互补形成新链。新合成的链又可作为模板参与下一轮循环, 使靶 DNA的拷贝数呈指数级增加。利用这一方法对性别特异基因(如Y染色体SRY基因 )进行扩增检测, 根据扩增产物在两个性别的不同表现判定被检测个体的性别[5]。本实验室已筛选到雄性特异的分子标记，可以准确鉴定乌苏里拟鲿的遗传性别。 

2 实验过程

2。1 实验材料

本实验所用的材料是由去年王辉老师用雄激素喂养的乌苏里拟鲿。从中随机取出健康未有损伤的乌苏里拟鲿作为实验材料。

2。2 取材

将所取出的实验材料放置在解剖盘里进行处理，解剖出所有实验材料的性腺用4%多聚甲醛固定24小时，然后再用30%、50%、70%梯度酒精脱水30min，将脱水后的材料置于70%酒精中，放在冰箱中保存备用。

用剪刀剪下将所有实验材料的尾鳍，用无水乙醇固定在离心管中，放在冰箱里保存备用。

2。3 基因组DNA的提取

(1) 准备好DNA抽提缓冲液（常温下混浊），高温下变清澈。

(2) 将DNA抽提缓冲液放入烘箱中，设置温度为85℃，放置15分钟变清澈后取出，静置使其降温至55℃左右（不烫手）注意从烘箱中取出药品的时候要带着手套，以免烫伤。

(3) 将超纯水机插上电源，打开开关，打开自来水，听到水管发出“嗡嗡”声即通水，然后接一杯蒸馏水。

(4) 将尾鳍材料从冰箱中取出，用洁净的镊子取出乌苏里拟鲿尾鳍组织100-200mg（约指甲盖大小）放入1。5 mL离心管中，用洁净手术剪刀将其剪碎，剪的越碎越好。注意在剪下一个前要将镊子和剪刀在蒸馏水中漂洗，以防样品污染。

(5) 用移液枪向离心管中加入500μL抽提缓冲液和2。5μL PK蛋白水解酶，摇晃后置于55℃烘箱中消化反应2小时。（每隔5分钟取出摇晃下样品管，使成团组织块分散），消化至样品管内看不到组织碎块完全成为液体。

(6) 从烘箱中取出消化好的样品，使其冷却至室温。

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