(8) 用管架夹住离心管手工上下轻轻翻转样品15min，混匀管内容物使之成为乳浊液。

(9) 混匀后把离心管置于离心机中，在4℃下，10000rpm离心10min,使有机相与水相充分分离。（注意在放置离心管时要平衡）轻轻吸取离心管中的上清液，转移至新的无菌离心管中，弃去两相界面的蛋白质和下层有机相。（离心后样品管内液体被分为三层，上层水相上清液，中层蛋白质层，下层有机相）。

(10) 重复步骤8-9三次。

(11) 向离心管中加入与抽出来的上清液等体积的氯仿异戊醇混合物。用管架夹住离心管手工上下轻轻翻转样品15min，混匀后把离心管置于离心机中，在4℃下，10000rpm离心10min。