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我们事先了解描述了斑马鱼Lmo4b基因的克隆、表达及其发展史（Lane et al.,2002）。根据N端与C端的相似度将lmo4基因分类。我们从GenBank数据库里识别了一个斑马鱼次级基因(Accession#AF398515)。这个基因与哺乳动物Lmo4有较大的同源性，我们将它命名为lmo4a。我们之前所描述的基因，指lmo4b,有固定的定位，此外在斑马鱼Lmo4a和其他哺乳动物Lmo4基因之间高度保守，表明存在潜在的新功能(Fig. 1A, in red).。我们也介绍在其它地方关于lmo4a的同源分析(S. Amin and M.E. Lane, in preparation).。
为确定lmo4b的功能，我们用两个5’UTR区域不重叠的转录抑制玛琳（lmo4b-MO）抑制其表达。Lmo4b-Mo注射的胚胎与对照组比对显示受精后3天其胚胎有整个轴向的延长，并且在头、眼（Figs.1C到F）、耳(Figs.1G和H)及胸鳍(Figs.1I和J)均有异常表现。我们对所有lmo4b表达作用的组织(Lane et al.,2002)都做了记录。我们进行含有4个碱基错配的玛琳序列（4mm-MO;Figs.1C,E,G和I）的注射作为对照。在以后更长远的实验中，除了图Figs.7和8中的例子，我们将注射lmo4b-MO的胚胎（实验组）与注射4mm-MO的胚胎（对照组）进行对比来说明问题。
我们通过测试含靶序列5’UTR的lmo4b玛琳通过外生mRNA而阻碍蛋白质翻译，其次是lmo4b开放阅读框融合进一个C端的6x-MYC标签。胚胎一开始先注射mRNA，紧跟着注射lmo4b-MO混合物或者4mm-MO。在免疫印迹中，注射mRNA和lmo4b-MO胚胎的提取物与注射mRNA和4mm-MO（Figs.1B）胚胎的提取物比较，前者45000道尔顿的外生Lmo4b-MYC带有明显的减少。
2. lmo4b的缺失导致中分节阶段前脑及视觉原始细胞的增大
我们通过形态学的方法及原位杂交研究了更早期胚胎的前神经元缺陷在何时才可被发觉。在10体节时期，玛琳注射的胚胎相对于对照组的胚胎在眼部及视前叶区域有扩大现象，在尾部其他区域并未出现形态学上明显的不同。注射的剪接阻碍型玛琳专门针对于受精卵的转录产物，表型上类似转录阻碍的胚胎（本文未显示）。然而，剪接阻碍型玛琳常常出现目标以外的影响，包括早期大脑及眼睛的坏死，因此本文中的所有实验均使用转录阻碍型玛琳。头部高度（HH）及眼睛直径（ED）的测量在胚胎发育10体节时期进行，结果在Figs，2A和B的划线部分显示，结果表明玛琳注射胚胎与其对照组间存在极显著差异（Fig.2C；HH中p=8.7x10-5 ，ED中p=2.2x10-5）
玛琳注射的胚胎头部较对照组增大24%，眼睛较对照组增大31%。
端脑及中脑zic1表达区域在侧面（Figs.2D和E）及背部（Figs.2F和G）。通过背部形态学及pax6b表达的观察，眼睛囊泡是在中侧暂时的扩大（Figs.2H和I）。Pax2a在受精后24小时表达（Figs.2J和K蓝色部分），显示了视柄及视网膜与视炳间模糊边界的增大，pax2a在细胞中的表达类似于视网膜细胞形态的延长和pax6b的表达（Figs.2J和K红色部分）。我们也记录了注射玛琳胚胎视叶前区域的扩大（Figs.2L和M虚线处），这与早期发现的前脑增大表现一致。此外，我们观察到下丘脑在受精后28小时（Figs.2N和O）腹侧nk2.1a表达的增大。Shh和emx1表达的染色显示没有局部的不同，两者在下丘脑前背部和后腹部是分别独立表达。
3.lmo4b抑制的胚胎中前神经组织的扩大是由于前神经组织边界的破坏所致。
为描述前脑局部表达的本质，我们通过针对前神经元基因的原位杂交探针的混合物将其区分，测量比较了10体节时期前后大脑的长度(Figs 4A-C)。Zic1基因在端脑和中脑表达。Pax2a基因在后脑中部边界(MHB)表达，而krox20是在后脑的第三(r3)和第五菱脑原节(r5)表达。端脑和中脑（区域a）被zic1结构域所区分开。中脑（区域b）被从zic1结构域的尾部边缘到pax2a表达域的垂体边缘所区分。后脑垂体(区域c)被从pax2a尾部边缘表达域到krox20条纹的垂体边缘所区分开。我们之前已说明lmo4b是在原肠胚及早期分节时期的后脑垂体中表达（Lane et al.,2002）。最后，从r3垂体末端到r5局部末端所测量的大小变化并不是由于lmo4b的功能而正常化，因为lmo4b不是在任何时候都在这个区域表达。因而没有由于lmo4b缺失而期望的改变产生；并且，对在玛琳注射的胚胎和其对照组之间的这种尺寸大小测量差异并没有非常显著的价值（p=0.06）。正常化的标准见Figs.4C。我们注意到端脑与中脑在长度上的改变有统计学上的意义（区域a；p=0.009），而中脑（区域b;p=0.7）或者后脑垂体（区域c;p=0.055）在长度上并没有显著差异，因而我们得出这样的结论：前脑的扩张表达并不会以损失更多的尾部神经组织为代价。我们因此猜测lmo4b缺失引起的前神经组织的扩张是通过前神经边界细胞的补充而增加或通过细胞增殖增加，或者这两种机制均参与。