4。加入600 mL Lysis Buffer（9。34 mL TE Buffer，0。6 mL 10%的SDS，0。06 mL Proteinase k三者混合而成）。

5。在37 ℃的条件下孵育45 min。

6。将其取出，加入300 μL氯仿和300 μL苯酚，进行抽提。上下颠倒若干次，而后4 ℃以14。8 rpm的转速离心10 min。

7。重复步骤6数次，至几乎无白色物质。

8。吸取上清液到新离心管中并加入400 μL氯仿，上下混合几次（尽可能的温和，不宜太剧烈），接着离心1 min左右。

9。吸取上清到新的1。5 mL的离心管中，向其中加800 μL无水乙醇（-20 ℃），上下倒置数次，有透明丝状物出现。冰置（-20 ℃）30 min。

10。取出以13。8 rpm转速，4 ℃离心15 min。

11。弃上清，加入1 mL的75%乙醇，而后振荡。离心2 min，弃上清。

12。倒置在无尘纸上干燥（也可以旋转干燥）。

13。加入RNase，再加入100 μL TE Buffer振荡，并孵育45 min。

14。最后测浓度，电泳跑胶验证。来*自-优=尔,论:文+网www.youerw.com

    ② 提取过程的几个注意事项：

1。抽提步骤需格外细心，千万不可吸到白色物质（蛋白质），否则会造成蛋白质污染；

2。整个实验过程需操作温柔，防止DNA的人为降解，而影响基因组浓度；

3。在抽提吸取上清时，应遵循“宁缺毋滥”的原则，尽可能确保吸取的清液没有蛋白质等；

4。提取基因组时所有使用的试剂以及仪器要经过灭菌操作，以保证基因组的纯度；

5。步骤6 到步骤 8须在通风橱中进行，因为氯仿与苯酚均为有毒有害物质；

6。最后几步加入的乙醇，TE Buffer等最好提前预冷，有利于提高基因组的浓度及质量。

2。2。3  制作感受态细胞

用经过灭菌操作后的牙签或者枪头，从LB板上挑选大肠杆菌BL21单菌落，接种在3-5 mL的由Milli-Q二级超纯水配制而且经过灭菌处理过的LB培养基里，而后37 ℃摇床孵育大约12小时，直到它成长到对数生长后期。再将该菌液以1:100的比例接种在30 mL的LB培养基中，然后将其置于37 ℃摇床中孵育2-3小时，直到OD578大约为0。5即可。

1。将该培养液转入离心管中，放在冰上静置大概10 min，而后在4 ℃下以4000的转速离心10 min左右。

2。倒掉上层清液，在沉淀的菌种中加入15 mL Tfb1缓冲液，而后放在冰上静置大约30 min，在4 ℃下以4000 rpm离心5 min左右。

3。弃去上清液，向其中加入2 mL Tfb2缓冲液，放在冰上静置若干分钟，即成为后续实验所需要用到的感受态细胞悬液。

4。将该悬液按照80 μL一小份分装到1。5 mL离心管中，并将其放入刚取出的液氮中迅速冷却，最后贮存于-80 ℃冰箱中冷冻保存，即可用于转化实验的进行