摘要：麦芽糖淀粉酶能够水解淀粉产生α-麦芽糖，后者广泛用于在食品、酿造和医药等工业领域。本实验通过基因克隆将Corallococcus sp。 EGB来源的麦芽糖淀粉酶AmyZ基因连接 pET-29a载体并转化到E。coli BL21 (DE3)中，实现了AmyZ在大肠杆菌中的可溶性异源表达。重组AmyZ在以 0。5%（w/v）的可溶性淀粉为底物时，其最适反应pH为7。0，最适反应温度为50℃，酶活达980U/mg。Mn 2+对酶活有一定的激活作用，Ni+、Cr+、Zn2+、Fe3+、Cu2+对酶活有不同程度的抑制作用。以麦芽寡糖和可溶性淀粉等多糖类物质为底物时，水解产物分析显示该酶作用的主要产物为麦芽糖。86090

毕业论文关键词：麦芽糖淀粉酶AmyZ；重组表达；酶学性质

The Gene Cloning and Expression and Enzymatic Properties of  Maltose Amylase AmyZ from Corallococcus sp。 EGB 

Abstract： Maltose amylase can catalyze the hydrolysis of starch。 It is widely used in food, brewing, feed and medicine and other industries。 In this study, the maltose amylase AmyZ from Corallococcus sp。 EGB was cloned and ligated into the pET-29a vector。The recombined plasmid pET-29a-amyZ was transformed into   E。 coli BL21 (DE3)and expressed successfully。 The optimum reaction pH of AmyZ was 7。0, and the optimum reaction temperature was 50 ℃。 Mn2+ is an effective activator of AmyZ，and the activity was significantly inhibited by Ni2+，Cr3+, Zn2+, Fe3+ and Cu2+。 AmyZ hydrolyzes various starch and maltooligosaccharides to maltose without production of glucose。

Key words: Maltose amylase AmyZ；Recombinant expression；Enzymatic properties

目录

摘要： 1

关键词： 1

Abstract 1

Key words 1

1  材料与方法 2

1．1 材料 2

1．1．1 菌株与质粒 2

1．1．2 培养基与试剂 2

1．1．3  PCR扩增使用的引物 2

1．2  表达载体pET-29a-amyZ的构建 2

1。2。1粘细菌DNA的提取 2

1。2。2 amyZ基因的扩增 2

1。2。3amyZ基因片段与pMD19 T-simple连接 3

1。2。4 amyZ基因片段与pET-29a连接 3

1。2。5普通感受态细胞的制备 3

1。2。6转化感受态细胞 3

1。2。7 AmyZ的诱导表达 4

1。2。8 AmyZ的纯化 4

1。3 AmyZ酶学性质研究 4

1。3。1 AmyZ酶活性测定方法 4

1。3。2温度和pH值对重组酶AmyZ活性和稳定性的影响 4

1。3。3金属离子和常用化合物对重组酶AmyZ活性的影响 4

1。3。4 AmyZ的底物特异性 4

1。3。5重组酶AmyZ对不同底物的水解产物分析 5

2  结果与分析 5

2．1表达载体pET-29a-amyZ的构建 5

2．2 AmyZ的诱导表达与纯化 5

2．3温度和pH值对重组酶AmyZ活性和稳定性的影响