1。2。5普通感受态细胞的制备

将-70℃保存的 E。 coli DH5α菌种在 LB 平板上划线纯化，37 ℃过夜培养，挑取单菌落接种至 3 mL 液体 LB 中，37 ℃、180 rpm 培养 8 h，按 1%的接种量转接于液体LB 培养基（50 mL/250 mL 三角瓶），37℃、200 rpm 振荡培养至 OD600 为0。4，将菌液分装至 50 mL无菌离心管，冰浴10 min，4 ℃、4000 rpm 离心3 min收集菌体，以20 mL预冷的 0。1 M CaCl2重悬菌体，4 ℃、4000 rpm 离心 3 min，弃上清，加入2 mL冰预冷的0。1 M CaCl2 轻轻振荡重悬菌体，加入等体积30%灭菌的甘油，小份分装（100μL/管），-70℃保存［9］。