群体感应自杀种群在富营养培养基中的生长模型(4)
仪器设备
试管、24孔板、96孔板、移液管（5mL、10mL）、移液枪（20μL、100μL、1000μL）、三角瓶(500 ml 、250ml、100ml)、烧杯、量筒、玻璃棒、锥形瓶、精密pH计、灭菌锅、煤气灯、二氧化碳培养箱、恒温摇床、生物安全柜、低温保存箱。
2.2 拟采取的方法
扩菌：取5毫升LB液体培养基放入试管，接种一个单菌落，将试管放入37℃、200rpm的恒温摇床中过夜培养16小时。
接种：菌液以1：1000的比例接种到液体培养基中。
CFU：取20ul加入180μL无菌水中进行一定梯度的稀释，然后取10μL菌液加入已倒好LB固体培养基的24孔板中，轻微地摇晃均匀。放入37℃培养箱中静置培养，半小时后倒置。培养20小时左右拿出计数。
2.3 拟定的实验方案
9mL体系，LB液体培养基，接种野生型top10F'，三个pH（5.7、6.5、7.4），四个IPTG浓度（0、0.05、0.1、1mM），30℃、240rpm培养35h,期间取样14次，测CFU。
取12支试管并编号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12（其中1、5、9号管为对照），按表2.1所示加样。
表2.1 加样表
管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
LB(mL) 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9
pH 5.7 5.7 5.7 5.7 6.5 6.5 6.5 6.5 7.4 7.4 7.4 7.4
IPTG(μL) 0 4.5 9 90 0 4.5 9 90 0 4.5 9 90
菌液(μL) 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9
A.比较在不同pH值的培养基中的生长现象
分别配制pH5.7，pH 6.5，pH7.4 的液体培养基与固体培养基。
培养基按表2.2和表2.3所示配方配好后，放入121℃灭菌锅中灭菌20分钟，拿出后冷却至50℃左右（用手摸着不烫），按稀释一千倍的比例加入卡那霉素，摇匀备用。LB固体培养基加好卡那霉素后倒入24孔板中，凝固后倒置备用。
培养基的pH值用pH计测量。pH计的使用方法为：预先将厂家附赠的试剂粉末配置好pH6.86和pH4.13的溶液，测量当下液体温度并在pH计上显示的温度调整到当下温度，将测定模式切换到pH测量，将电极棒浸入pH为6.86的溶液中轻轻搅动，待数值稳定后将定位数值调到6.86后用蒸馏水冲洗电极棒，然后将电极棒浸入pH为4.13的溶液中轻轻搅动至数值稳定后将斜率的数值调到4.13，然后就可以测定培养基的pH值了。可使用盐酸和氢氧化钠调节pH值
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