降解亚硝酸盐菌种诱变及鉴定研究(2)
3.3.2紫外诱变致死率实验[22-23] 10
3.3.3紫外诱变菌种的初筛 10
3.4 硫酸二乙酯诱变 11
3.4.1菌悬液制备 11
3.4.2硫酸二乙酯诱变致死率实验[24] 11
3.4.3 硫酸二乙酯诱变菌种的初筛 11
3.5 将优良菌株进行酶基因PCR扩展与分析 11
3.5.1提取基因组DNA——酚氯仿法 11
3.5.2进行酶基因PCR扩展与分析 12
4.实验结果与分析 12
4.1亚硝酸盐含量标准曲线 12
4.2菌种特性研究 13
4.2.1革兰氏染色镜检 13
4.2.2菌体生长曲线 14
4.2.3亚硝酸盐降解曲线 15
4.3紫外诱变 16
4.3.1紫外诱变致死率 16
4.3.2 紫外诱变菌种的初筛 17
4.3.3 紫外线诱变菌株遗传稳定性实验 17
4.4 硫酸二乙酯诱变 18
4.4.1 硫酸二乙酯诱变 18
4.4.2 硫酸二乙酯诱变菌种的初筛 19
4.4.3硫酸二乙酯诱变菌株遗传稳定性实验 19
4.5基因组DNA的PCR扩展 20
5.结论 20
致 谢 22
参考文献 23
1. 引言
1.1 亚硝酸盐简介
亚硝酸盐和硝酸盐是生物圈内基本的物质循环之一氮循环的重要中间物质，广泛存在于水、土壤和植物中，是自然界普遍存在的含氮化合物。在土壤、水域及植物中都能发现亚硝酸盐广泛存在[1]。除了天然来源，人为添加也是一种亚硝酸盐的来源方式[2-3]。
亚硝酸盐外观及滋都与食盐相似，并在工业、建筑业中广为使用，亚硝酸盐作为国家食品卫生法允许使用的食品添加剂，能防止食品腐败变质，具有显著的杀菌或抑菌效能，在肉制品加工中被广泛使用。亚硝酸盐还能够抑制肉制品中微生物的生长，特别是对肉毒梭状芽抱杆菌繁殖的抑制，肉制品具有良好的弹性和口感的原因也源于亚硝酸盐能消除原料的异，提高食品的口感和品质[4]。到目前为止，科学家们还没有发现任何一个物质能同时起到上述这些作用，除了亚硝酸盐[5]。
但亚硝酸盐并不全是益处，它也具有一定的毒性，如果人体食用并吸收过量的亚硝酸盐会对自身构成一定的危害。因此，世界上许多国家都将食品中亚硝酸盐含量作为食品安全的重中之重。他们研究利用生物、化学等技术方法以降低亚硝酸盐在肉制品中的含量来严格控制亚硝酸或硝酸盐的使用量。
亚硝酸盐还原酶（Nitrite Reductase，NiRs）就是一种能催化亚硝酸盐还原，有效地降解亚硝酸盐的物质[6]，这类酶是氮循环中反硝化过程的关键作用酶。
1.2 亚硝酸盐的主要来源
1.2.1 来源于蔬菜中的亚硝酸盐
在种植蔬菜时，使用大量的氮肥，而蔬菜大多以吸收硝态氮为主，本身容易富集硝酸盐，再加入过量的硝酸盐肥料后，又增加了植物中硝酸盐的积累。高硝酸盐含量对蔬菜本身是无害的，但是这些硝酸盐会在人体的口腔和胃腔中的微生物作用下还原成对人类健康有害的亚硝酸盐，被人体吸收。曾有相关报道指出，人体摄入的硝酸盐有81.2％都是来自新鲜蔬菜[7]。
1.2.2 来源于水中的亚硝酸盐
环境中的水产养殖投放的饲料投饵、施肥、生活污水、生活垃圾等均是硝酸盐与亚硝酸盐的污染源[8]。这些含氮化合物经过生物、化学转换后，会有大量硝酸盐、亚硝酸盐等化合物生成，水体中的亚硝酸盐具有富集作用，随着河、湖水的流出而渗入地下，从而造成地表水和地下水的硝酸盐、亚硝酸盐污染。人类饮用后会造成多种疾病，水体中高浓度的亚硝酸盐还会危害养殖生物，导致养殖品种频繁发生病害。
上一篇：水中亚硝酸盐的微生物处理方法研究