诺如病毒衣壳蛋白VP1细胞表面展示体系的构建(2)
该病毒在全球广泛分布，资料显示，在发达国家，病毒性胃肠炎暴发中由NV引起的占93%，每年在所有的非细菌性腹泻暴发中，60%-90%是由诺如病毒引起。在发展中国家，5岁以下儿童的感染率可高达100%，感染后的潜伏期6-96个小时，平均潜伏期24-30个小时。临床常表现为起病急骤、恶心、呕吐、腹部绞痛和头疼等不适症状，而腹泻、发热等症状都较轻微。诺如病毒感染对象主要是成人和学龄儿童，寒冷季节呈现高发。在中国5岁以下腹泻儿童中，诺如病毒检出率为15%左右，血清抗体水平调查表明中国人群中诺如病毒的感染亦十分普遍[1]。
人类主要通过被污染的食物摄入诺如病毒，主要是海产品牡蛎。诺如病毒作为一种食源性腹泻病毒首先在美国被发现后，世界各地相继出现了有关诺如病毒的报道。今年年初，我国各地的学校等人群密集场所相继爆发了诺如病毒感染事件。患者有发烧、恶心、腹泻、呕吐等症状，儿童发病以呕吐为主，成人则以腹泻为主，表现为24小时内腹泻可达4至8次，粪便为稀水便或水样便，无黏液脓肿。此外，也可见头痛、寒战和肌肉痛等症状，严重者可出现脱水症状[3]。
近些年，许多国家已对我国进出口水产品中诺如病毒的检测提出要求，因此，对诺如病毒的检测已不能仅仅局限于原来的实验室复杂、繁琐的检测，快速、经济且适用于大量样品的检测的方法的研究已日趋重要。但目前，世界上还没有一种快速、有效且价格低廉的诺如病毒检测试剂盒。诺如病毒变异性大，检测困难，但利用原核表达的诺如病毒衣壳蛋白，其特异性保守的11个氨基酸可以很好的展示在外，利用这种蛋白免疫动物，可以获得具有广泛识别能力的抗血清，该抗血清可以从一定程度上解决诺如病毒变异性强、难于检测的缺点[5]。
1.2病毒的基因组与遗传
诺如病毒属于单股正链RNA病毒，基因组全长7.5～7.7kb。基因组的5’末端共价连接着一个蛋白Vpg，3’末端含有PolyA尾，包括三个开放阅读框（open reading frame，ORF）。Vpg通过共价键与病毒RNA结合，并为其提供5’帽子结构。众多科学家认为其作用是把病毒基因组转运到负链RNA合成的部位[10]。
这3个开放阅读框（图1.1），分别包括ORF1、ORF2、ORF3。其中ORF1编码非结构蛋白，包括核苷三磷酸酶、VPg（Vpg通过共价键与病毒RNA结合，并为其提供5’帽子结构，据推测，Vpg的作用是把病毒基因组转运到负链RNA合成的部位）、蛋白水解酶和RNA依赖的RNA聚合酶等，该蛋白长约5kb；ORF2编码56kD的主要衣壳蛋白VP1，长约1.7kb。
图 1.1 诺如病毒衣壳蛋白和基因组结构图
可以推测，基因组RNA作为负链RNA合成的模板，同时也作为用于包装的全长正链基因组RNA的转录模板，以及用于结构蛋白合成的亚基因组RNA的转录模板。在正链基因组和亚基因组链复制期间，在多腺苷酸化的基因组RNA存在时，Pol尿嘧啶化VPg，然后尿嘧啶化VPg作为引物起始负链的合成。而Pol起始负链RNA的复制并不需要引物，随后，可能是在位于ORF1上的定位信号的作用下，基因组RNA到达组装位点，并包装成病毒体[2]。
NV共有5个基因型（图1.2）：GI、GII、GIII、GIV、GV。其中GI、GII、GIV型感染人类，GIII感染猪，GV感染奶牛。其中GII-4一直被公认为NV流行的主要基因型。在其包含的20多个基因型中，GI包括8个亚型，GII包括19个亚型，GIII包括2个亚型，而每个亚型包括多种变异毒株。
图 1.2 诺如蛋白基因组
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