诺如病毒衣壳蛋白VP1细胞表面展示体系的构建(3)
NV是一类具有遗传多样性的病毒，该病毒变异性较强，自第1个NV核酸序列发表以来，越来越多的毒株通过RT-PCR得以鉴定，核酸序列的测定为同源性比较提供了更为精确的依据，科学家发现诺如病毒基因组ORF1的RNA多聚酶相对保守，同一基因组型相似性较高。不同株型之间氨基酸序列同一率一般高于60％，有的高达90％以上，甚至100％。基因组其他区域变异相对较多，但某些病原之间也有高度同源的[7]。
1.3病毒的检测方法
由于此类病毒在感染病人粪便中排毒量少，电镜检测不易发现，变异性强等特点，故给研究工作带来许多困难。而且到目前为止，尚缺乏有效的培养系统和小动物模型。九十年代以来，聚合酶链反应(PCR)的应用显示出快速、灵敏而特异地诊断诺瓦克样病毒感染的光明前景。同时，多抗检测试剂盒的研制也为诺如病毒快速大规模的检测提供了可行性。目前，诺如病毒的检测方法主要有三类：电镜检测、分子生物学检测、血清学检测[6]。
1.4病毒衣壳蛋白的体外表达技术
1992年，Jiang等人通过昆虫杆状病毒首次体外表达了NLV重组衣壳蛋白，该重组衣壳蛋白可以在体外自动组装成病毒样颗粒(VLPs)，其形态、抗原性均与实际NVs病毒衣壳蛋白相似，杆状病毒表达系统是一种真核表达系统，具有安全性高，容纳较大的外源基因的特点，具有完备的翻译后加工修饰系统和高效表达外源基因的能力。为提高病毒衣壳蛋白的表达量，研究人员将诺如病毒主要流行遗传型的几种衣壳蛋白编码基因按杆状病毒密码子进行了优化设计和人工合成，在昆虫细胞中表达，结果显示，其表达水平具有明显的提高，并可组装成病毒样颗粒，具有良好的功能[7]。
2000年，YODA等在原核系统中表达了诺如病毒的三个衣壳蛋白制备了多克隆抗体。这套原核表达系统相对于真核表达系统操作简单，尤其是当昆虫细胞培养难，而同时想获得大量目标产物时更具优势。研究发现，衣壳蛋白在原核表达系统中，产物不能自动组装成病毒样颗粒，说明病毒样颗粒的形成不是病毒与组织受体结合的必要条件。这样有利于研究各个片段的特性。通过不同重组片段免疫动物，表明衣壳蛋白的氨基端比羧基端富含抗原表位[3]。
腺病毒作为基因转移工具，具有其他病毒载体不及的优势：腺病毒颗粒比较稳定，基因组较少发生重排，插入外源基因在连续传代中保持不变；基因组操作较简单，易于制备大量病毒；可以感染分裂细胞和非分裂细胞，转导细胞种类多；外源基因表达水平较高。具有抗原制备快，操作安全，抗原不需纯化等优点。
毕赤酵母表达系统兼有原核表达系统易于操作培养、快速生长、表达量高的优点，又具有对外源基因进行正确翻译和加工修饰的功能[3]。
研究人员将诺如病毒衣壳蛋白基因转至土豆苗，通过培育、收获果实。实验显示，志愿者服用疫苗后，不产生呕吐、腹泻等症状。口服植物疫苗产量大，易生产，对人体无伤害，是今后研发疫苗的发展方向
虽然已经研究出了多种表达系统表达诺如病毒衣壳蛋白，但其各有优缺点：杆状病毒表达系统效率较高，但费时，相对昂贵。原核表达系统操作简单，但有些不能组装成病毒样颗粒。腺病毒表达系统开发疫苗要考虑到重组蛋白可能携带宿主基因，存在安全隐患。酵母表达和转基因植物表达系统开发疫苗前景较好[11]。
1.5本研究的目的与意义
诺如病毒是目前除轮状病毒外，致使人类非细菌性腹泻的又一大病因。近些年，许多国家已对我国进出口水产品食物中诺如病毒的检测提出要求，因此，对诺如病毒的检测不能仅仅局限于原来的实验室中繁琐、复杂的检测，快速且适用于大量、低成本产品的检测方法的研究已日趋重要。通过前面的介绍可以了解到，该病毒目前仍然无法在动物细胞内培养，单纯建立一种NV检测方法是远远不够的。因此，对于诺如病毒抗血清的获得只能通过体外重组表达衣壳蛋白免疫动物的方式获得。原核表达的诺如病毒，具有更加广泛的检测范围。此外，寻找一种简单快捷的方法能准确的检测出食物携带NV的情况，控制好这类产品的质量具有重要的理论意义和经济意义：一方面可以避免疾病的发生，保护人们的健康，另一方面，也可以减少不必要的出口外贸的损失[11]。
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