摘要为研究大豆耐盐分子机制，本实验主要对耐盐基因GmPE70在大豆根中的过量表达进行研究。首先,我们从大豆根中提取总RNA，将其中比较成熟的mRNA逆转录成cDNA。接着，我们采用高保真酶将GmPE70基因全序列1646bp扩增出来，插入中间载体形成T-GmPE70。T载体扩增后，通过限制性内切酶将GmPE70基因连接到植物表达载体pDL28-RFP中，即构成pDL28-GmPE70-RFP表达载体。将其转化到发根农杆菌k599中，侵染大豆子叶节获得阳性转基因根。最后，我们通过荧光显微镜筛选具有红色荧光的阳性转基因根。本次实验的开展为后续研究GmPE70基因在大豆耐盐响应中的分子机制奠定了坚实的基础。88072

毕业论文关键词：大豆；发根农杆菌k599；GmPE70；耐盐基因；过表达

Abstract In order to study the molecular mechanism of salt tolerance in soybean, theGmPE70 gene was cloned from the soybean and overexpressed in the seedlingroots。 Firstly, the total RNA was isolated from the fresh roots of Union85140 soybean seedlings。 Then, the cDNA was gained from mature mRNA by reverse transcription。 Thirdly, the target gene was amplified by high-fidelity PCR and cloned into the plant expression vector pDL28/Ubi10::RFP。 The pDL28-35S::GmPE70/Ubq10::RFPconstruct was then transformed into the cotyledonary node wound via Agrobacterium rhizogenes strain k599。 Finally, the transgenic roots with red fluorescence were selected by fluorescence microscope。 This study will provide important material for further understand the molecular mechanism of GmPE70 on enhancing soybean’s tolerance to salinity。源-于,优W尔Y论L文.网wwW.youeRw.com 原文+QQ75201,8766

Keyword:  Soybean; Agrobacterium rhizogenes strain k599; GmPE70; Salt tolerant gene; Overexpression

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引言 4

1。实验材料设备 5

1。1实验材料 5

1。2 实验试剂 5

1。3 仪器设备 5

1。4 培养基 5

2。实验方法 6

2。1大豆根总RNA提取 6

2。1。1大豆根部组织破碎研磨 6

2。1。2大豆根RNA的提取 6

2。2 cDNA模版的合成 7

2。3 PCR扩增目的基因 8

2。3。1PCR扩增 8

2。3。2 PCR反应引物序列 8

2。3。3PCR反应条件 9

2。4 PCR产物纯化 9

2。5 T载连接体系 9

2。6 T-目的基因转化到大肠杆菌（热激法） 9

2。7重组质粒鉴定 10

2。7。1 摇菌扩增 10

2。7。2 提质粒 10

2。7。3双酶切检测 10

2。8冻融法转化农杆菌 12

2。9转基因阳性根的筛选 12

2。9。1大豆种子无菌处理 12

2。9。2制备农杆菌 12

2。9。3大豆侵染实验 12

2。9。4生根培养