不同产地连钱草的药用品质综合评价的研究(2)
药用植物药用品质的综合评价体系，应该具有全面性、科学性、系统性、较强实用性、较强操作性和可量化性。迄今为止，关于综合评价的研究报道并不算多，王年鹤等 [2] 提出过初步定量化评价标准的研究，从药用价值、分类学意义、分布及生境要求、野生资源量等8个方面进行评价，其评价标准已经提出了初步的定量方法，受到了普遍的赞同。在查阅大量资料后，本研究发现评价时还可以细化和量化其他方面，此外不同影响因素的相互侧重点并不相同，所以权重系数也具有差异性。
不同的产地对连钱草的生长具有重要的影响，由于不同产地的连钱草药材综合品质差别较大，势必在临床应用时对其治疗效果产生影响，为了使这种影响降到最低，应该规范药材的种植，严格按照国家法规《中药材生产质量管理规范》，才能保证药材质量的一致性，才能保证临床用药的安全与有效[3]。
1.实验材料与方法
1.1实验材料
1.1.1实验材料 实验所用活血丹植株采自全国15个不同省市，采集地点及相关采集信息见表1，所有采集样品经过南京农业大学中药材研究所郭巧生教授鉴定为活血丹G.longituba ( Nakai) Kupr。样品去杂、洗净，自然干燥后粉碎，然后过60目筛网，在闭光、阴凉干燥的环境下保存备用。
1.1.2主要仪器和试剂 电子天平（山海精密仪器厂）；紫外可见分光光度计（Alpha-1506型，上海谱元仪器有限公司）；美国Waters 2695/2996型液相色谱仪（美国Waters公司），含四元梯度洗脱的溶剂输送系统、在线真空脱气机、自动进样系统、柱温箱、二极管阵列检测器及Enpower 2.0 色谱工作站；PS-60A型超声波清洗器（深圳洁康超声波清洗机有限公司）；ZDHW型调温电热套（北京中兴伟业仪器有限公司）；恒温鼓风烘箱（XMTD-8222型，上海精宏实验设备有限公司）；Infinite M200 多模式酶标仪（瑞典Tecan公司）；恒温水浴锅（HH-S型，巩义市苏华仪器有限责任公司）。
乙醇，醋酸盐缓冲液，FeCl3溶液，过硫酸钾溶液，抗坏血酸溶液（分析纯）；乙腈，甲醇（色谱纯）。
1.2实验方法
1.2.1醇溶性浸出物的提取和测定 提取方法：取2 g左右样品粉末，称定重量(W1)，放置在100 mL的锥形瓶中，分别加入浓度为50%乙醇50mL，塞紧，称定重量，静置1h后，与冷凝回流管连接，加热至沸腾，在微沸状态下保持1 h。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用50%乙醇补足减失的重量，摇勻，用干燥滤器滤过，精密量取25 mL滤液，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105±2℃的环境中干燥3 h，干燥后置干燥器中冷却30 min，迅速精密称定重量(W2)，以干燥品计算供试品中醇溶性浸出物的含量(%)。重复三次。
1.2.2总黄酮含量的测定 分光光度法。精密称取样品粉末1.0 g，放置在具塞平底烧瓶中，加入65%乙醇60 mL，密塞，称定重量，40℃超声提取40 min，放冷后密塞，再次称定重量，用65%乙醇补足重量，摇匀；再次超声提取40 min。抽滤，滤液于75℃水浴下减压浓缩后，精密量取60%乙醇40 mL溶解析出物同时超声10 min；再次抽滤得滤液置于100 mL容量瓶中，用60%乙醇定容至刻度，即得供试品溶液，备用。
芦丁对照品溶液配制：精密称取芦丁对照品38.8 mg，放置在100 mL的容量瓶中，加60%乙醇60 mL，密塞，超声使其溶解，冷却后加60%乙醇至刻度，摇匀，得芦丁标准品溶液0.388 mg•mL-1，在4℃环境下贮藏。
标准曲线绘制：精密量取芦丁对照品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.2、1.6 mL于25 mL容量瓶中，加入8 mL1.5% AlCl3溶液和4 mLpH5.5的NaAc-HAc缓冲液，并用60%乙醇水溶液定容至刻度，摇匀，静置0.5 h。以60%乙醇溶液为空白对照，于420 nm下进行扫描，并对吸光值和芦丁含量进行回归处理，绘制标准曲线。