不同产地连钱草的药用品质综合评价的研究(3)
样品中总黄酮含量测定：精密量取供试品溶液1 mL于25 mL容量瓶，按上述操作进行显色反应，以60%乙醇溶液为空白对照，于420 nm下测定吸光值，并根据回归方程计算样品中总黄酮含量。
1.2.3绿原酸、咖啡酸、迷迭香酸含量的测定 高效液相色谱法。精密称取样品粉末1.0 g，置于锥形瓶中，加入40%乙醇40 mL，密塞，称定重量，超声提取100 min，放冷后密塞，再次称定重量，用40%乙醇补足重量，提取液过0.45 μm微孔滤膜，续滤液即为供试品溶液，备用。
绿原酸、咖啡酸和迷迭香酸对照品溶液配制：分别精密称取绿原酸、咖啡酸和迷迭香酸对照品适量，加无水乙醇溶解定容，4℃贮藏，配成浓度分别为20.16， 25.30，121.40μg •mL-1的标准品溶液。
对活血丹中绿原酸（CA）、咖啡酸（Caffeic acid）和迷迭香酸（RA）的液相色谱测定方法进行考察，确定检测条件为：以乙腈（A）—0.01%磷酸（B）为流动相进行梯度洗脱，洗脱程序为：0~15 min，A：10%~15%；15~20 min，A：15%~17%；20~23 min，A：17%~25%；23~33 min，A：25%~35%；33~36 min，A：35%~95%；36~38 min，A：95%；38~43 min，A：95%~10%；43~45 min，A：10%，色谱柱为迪马钻石plus C18，4.6 × 250 mm，5 μm；检测波长为326 nm；流速为0.8 mL•min-1；进样量为10 μL。
1.2.4熊果酸、齐墩果酸含量的测定精密称取样品粉末0.5 g，置于锥形瓶中，加入88%乙醇39 mL，密塞，称定重量，超声提取60 min，放冷后密塞，再次称定重量，用88%乙醇补足重量，提取液过0.45μm微孔滤膜，续滤液即为供试品溶液，备用。
分别精密称取齐墩果酸、熊果酸对照品14.1mg和11.2 mg，用甲醇溶解，定容至25 mL，4 ℃贮藏，配成浓度分别为0.564 mg•mL-1和0.420 mg•mL-1的标准品溶液。
对活血丹三萜酸液相色谱测定的流动相体系，流动相洗脱体系等参数进行考察，确定检测条件为：以乙腈（A）—0.05%乙酸铵（B）为流动相进行等度洗脱，洗脱比例（A : B）为77:23，色谱柱为迪马钻石plus C18，4.6 × 250 mm，5 μm；检测波长为210 nm；流速为0.5 mL•min-1；进样量为10 μL。