植株类型 野生型 杂合插入型 纯合插入型

基因型 +/+ +/- -/-

示意图

插入验证（BP+RP）  √ √

纯合验证（LP+RP） √ √ 

 表1 预期验证PCR结果

1。5 基因表达检测

1。5。1 植物RNA的提取

植物RNA的提取使用康为公司的植物RNA提取试剂盒，方法如下：文献综述

将50-100mg的植物组织在液氮中迅速研磨成粉末，加入600μl Buffer RL56℃孵育1-3分钟。将所得到液体转移到已装入收集管的吸附柱（Spin Columns FL）中，然后12,000rpm离心2分钟，将上清液转移到一个新的离心管中。在所得干净的裂解液中加入0。5倍体积的无水乙醇然后迅速混匀。再将得到的溶液转移到已装入收集管的吸附柱（Spin Columns RM）中，再次离心15分钟，弃掉废液。然后加入350 μl Buffer RW1，离心15秒后弃废液，再将吸附柱重新放回收集管。配制DNaseⅠ混合液：取50μl  RNase-Free Water，向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNaseⅠ（1U/μl），混匀，配制成终体积为80μl的反应液。向吸附柱中直接加入80μl DNase Ⅰ 混合液，20-30℃孵育15分钟。向吸附柱中加入350μl BUffer RW1,离心1分钟后弃废液。再加入500μl Buffer RW2，离心15秒，弃废液。重复一次。将吸附柱放回收集管，然后离心1分钟，将吸附柱放置于室温10分钟，使其彻底晾干。将吸附柱装入新的离心管中，向吸附膜的中间加入30-50μl RNase-Free Water，室温放置1分钟，离心1分钟，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。