利用CRISPR/Cas9技术定点突变拟南芥CRWN3基因(4)
②每 100 mg琼脂糖凝胶加入 300 µL Buffer DE-A，混合均与后，于 75 ℃水浴，每
隔1 min 摇晃一次，直至凝胶块完全融化；
③每管加 0.5 个Buffer DE-A体积的 Buffer DE-B，混合均匀；
④吸取步骤③中的混合液，转移到DNA 制备管中，12000 g室温离心 1 min，倒掉
滤液；
⑤将制备管放回 2 mL离心管内，加入 500 µL Buffer W1，12000 g，离心 30 s，倒
掉滤液；
⑥将制备管放回 2 mL离心管，加入 700 µL Buffer W2（确定加入指定体积无水乙
醇），12000 g，离心 30 s，倒掉滤液；
⑦再用 700 µL Buffer W2 洗涤一次，12000 g，离心1 min，倒掉滤液；
⑧将制备管置回 2 mL离心管中，12000 g空离1 min，以彻底弃掉滤液；
⑨将制备管放入一新的 1.5 mL离心管中，在制备膜中央位置加 30 µL 洗脱液EB，
室温静置溶解2 min，12000 g离心 1 min 洗脱 DNA；
⑩取 2 µL DNA 洗脱液用于琼脂糖凝胶电泳检测，-20 ℃保存备用。