3 结果 10

3。1 所提取华鳈组织 DNA 的浓度 10

3。2 Hepcidin 基因的 PCR 扩增结果 10

3。3 Hepcidin 基因的系统进化树 11

3。4 氨基酸同源性结果 12

4 讨论 13

致谢 18

1 前言

1。1 Hepcidin 基因研究概况

抗菌肽广泛存在于植物、昆虫、两栖类、鱼类、哺乳类等中[1]，它具有杀菌活力高、 来自优I尔Y论S文C网WWw.YoueRw.com 加QQ7520~18766 作用迅速、不产生耐药性等特点，是多细胞生物免疫防御的有效手段[2]，在多细胞生物生 存与进化过程中发挥着重要的作用。Hepcidin（heppatic bactericidal protein）基因是一类具 有调节铁代谢功能的抗菌肽[3]，参与宿主非特异性免疫反应，具有广谱抗格兰氏阳性和阴 性细菌及多种真菌等活性[4]， 也是机体受到感染和发生炎症时的一种急性反应物[5]。 Hepcidin     基因经检测证实它是一种富含半胱氨酸的抗菌蛋白[6]。

Hepcidin 基因首先分离自人体的血清，次年在人体的尿液中也分离到此基因，之后陆 续从鱼类及哺乳动物的肝脏中分离到 Hepcidin 抗菌肽基因。从杂交石斑鲈鱼中得到的 Hepcidin 基因[7]，是首次从鱼类中发现的 Hepcidin 基因，并相继在长鳍叉尾鮰（Ictalurus furcatus）[8]、斑点叉尾鮰（Ictalurus punctatus）[9]、美洲拟鲽（Pseudopleuronectes americanus） [10]、大西洋鲑（Salmo salar）[10]多种鱼类中克隆获得 Hepcidin 基因 cDNA 序列[10]，但有关 华鳈的 Hepcidin 基因的研究迄今尚未见报道。

1。2 华鳈概述

华鳈（Sarcocheilichthys sinensis）俗称花石鲫、黄棕鱼，是一种生活于水体中下层的 小型鱼类,在我国平原地区的大部分河流及其附属水体均有分布[12]。论文网因其体色鲜艳、易于饲 养等特点，作为观赏鱼，受到人们的喜爱，且华鳈数量较多，且肉质肥美，有一定的经济 价值[13]。有关华鳈的研究较少，且主要集中在分类、形态、生物学、驯养和繁殖等方面。

1。3 研究目的与意义

本实验研究华鳈的 Hepcidin 基因的克隆及其多态性位点分析，根据其他鱼类 Hepcidin 基因的保守序列设计简并引物，拟克隆获得华鳈 Hepcidin 基因序列，获得华鳈 Hepcidin 基 因 cDNA 片段，为今后在华鳈中开展该基因的多态性位点与抗病性状的关联分析、免疫机 制与免疫性能研究、抗病品种的分子标记辅助选育等提供基础资料。

2 材料与方法

2。1 材料

2。1。1  实验材料，试剂

实验所用华鳈来自洪泽湖，体格较好，无伤病。

引物 Hepcidin1，Hepcidin2 自己设计，并由生工生物工程（上海）股份有限公司。

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2。1。2  实验仪器和设备

VORTEX-5     震荡器：海门市其林贝尔仪器制造有限公司；