短波灭菌紫外线(Ultraviolet-C, UV-C)是一种波长介于200-280nm的紫外线。在对青椒、葡萄、番茄、草莓、桃子等的果蔬病害的控制、延缓成熟、诱导抗病等方面,低剂量的短波紫外线的照射都表现出了较好的效果[3]。有研究表明经过低剂量UV-C处理过的植物组织会产生兴奋效应[4],该效应可以使植物组织中的有益生理反应得到激发并有效延缓植物的成熟和衰老[5],激活细胞自身的防御反应,从而促使植物体内合成此生代谢物,进而提高了植物本身的防御能力和抗氧化活性[6]。
1-甲基环丙烯(1-methylcyclopropene, 1-MCP)是一种乙烯受体抑制剂。商业化的1-MCP为粉剂,遇水后会变为气态,能与乙烯受体发生特异的不可逆结合,使乙烯不能正常与受体结合,进而有效的削弱甚至阻止外源乙烯的诱导成熟和内源乙烯的合成[7]。有研究表明1-MCP能减少呼吸跃变式蔬果的乙烯产量、延缓果实衰老、延长保鲜期[8]。由此可见UV-C和1-MPC都能在一定程度上对蔬果的抗氧化延缓衰老有作用,但将两者结合处理的研究鲜见报道。
本试验拟研究UV-C复合1-MCP处理对西葫芦过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、丙二醛(MDA)等抗氧化指标变化的影响,为有效延缓西葫芦采后贮存期间品质下降进程以及延长保鲜期提供理论与实践参考。
1 材料与方法
1。1 试验材料
从淮安超市购买新鲜西葫芦,选择大小、色泽、成熟度基本一致,无损伤、无腐烂的西葫芦作为试验材料。
1。2 保鲜处理方法
将西葫芦按个数平均分成2大组,每组15只,将其中一组(处理组)先用紫外灯(254nm,30W)在距离西葫芦30cm处照射(剂量约0。3 kJ/cm2)5min,然后放入3L玻璃干燥器中,将6 mg/kg 1-MCP粉末加1 mol/L NaOH释放出气体(浓度为2 µL/L)熏蒸密封过夜处理12h,另一组西葫芦同时只在3L玻璃干燥器中过夜处理12h,作为对照(CK)。将处理组和CK组西葫芦分别按个数等分为15份(每份1只,0。25~0。30 kg),每只西葫芦用PE保鲜袋单独包装,贮藏于20℃常温生化培养箱中。每3天随机取样3袋(3个重复)测定下述指标。
1。3 检测指标与方法
1。3。1过氧化氢酶(CAT)活性
(1)粗酶液的提取:称5。0g西葫芦组织,加入5ml PBS提取缓冲液(100ml中包含200ul Triton X-100,77mg DTT(即5mmol/L)二硫苏糖醇,5g (即5%)PVP,其余用0。1mol/L pH7。8 PBS定容到100ml)匀浆,迅速均等转移入2只离心管,再于16000g 4℃离心20min,将上清液转入新离心管中暂放4℃冰箱供SOD、POD、CAT测定用。
(2)CAT活性测定
在比色杯中加入2。9 ml 20mmol/L H2O2,再加入100μl酶液启动反应,以加入蒸馏水为CK,15s后每隔0。5min记录240nm 紫外波长下内OD的变化。
计算公式:CAT活性(0。01ΔA240/ min。g)=ΔOD240×100/(T×W)
T-在EXCEL上选取线性变化间隔时间min,W-材料重量g。
1。3。2过氧化物酶(POD)活性
(1)粗酶液的提取:同上述CAT酶液提取法。
(2)POD活性测定:采用愈创木酚氧化法,以每分钟在470nm处吸光度变化0。01为1个酶活性单位(U)。
取一支试管,加人3。0mL 25mmol/L愈创木酚溶液和0。1mL酶提取液,再加人200μL 0。5mol/L H2O2溶液迅速混合启动反应,同时立即开始计时。将反应混合液倒人比色杯中,置于分光光度计样品室中,以蒸馏水为CK,15s后测定A470nm变化值,每30s记录一次变化值,记录10-15分钟。酶活性单位以0。01ΔA470/min。g表示。
POD(ΔA470/ min。g)=ΔOD470×100/(T×W),其中T—选取时间min,W-材料重量g。