1。3。3超氧化物岐化酶（SOD）活性论文网

（1）粗酶液的提取：同上述CAT酶液提取法。

（2）SOD活性测定：采用氯化硝基四氮唑蓝（NBT）光化还原法测定，以抑制NBT光化还原的50%为1个酶活力单位(U)。

取5支玻璃试管标号，各管均加入2。6ml上述反应混合液和 300μl 20μmol/L核黄素， 3-5号试管（样品管）中各加入100μl提取酶液，1（黑暗CK）、2号试管（光照对照ODmax）中加入100μl 0。05mol/L PBS(pH7。8)，混匀后，立即将1号对照管遮光置于黑暗中，2、3、4、5号管置于4000Lx光照 15-20min，最后在560nm波长下进行比色测定（以黑暗处理1号管中溶液为对照）。取重复样品测定3次，取平均值。

计算公式：

SOD(U/min·g) ==       ( ODmax -OD样品 )×V酶液总体积         

                        50％×ODmax×W(g) ×V1×T光照时间

ODmax：光照对照4#管的吸光度值；OD样品：3-5#样品管的吸光度值；V：酶液总体积(ml)；W：样品重量(g)；V1：测定时样品用量(μl)；T：光照时间（min）。

1。3。4 抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性

（1）粗酶液的提取

准确称取2。0g组织，加入5ml 酶提取液（含50mmol/L pH7。0 PBS，2mmol/L 抗坏血酸AsA，5mmol/L EDTA，4℃保存，现配现用），再加入少量石英砂于预冷的研钵中，置冰浴中充分研磨，离心（10000×g，20min，4℃），吸取上清粗酶液于小离心管中置于4 ℃备用或－20℃保存。

（2）APX活性测定

在3 个比色皿中各加入50μl 粗酶液，再加入3ml 反应液（含50mmol/L pH7。0 PBS，0。5mmol/L 抗坏血酸AsA，0。1mmol/L EDTA，室温保存，现配现用）；1 号比色皿中不加AsA 和H2O2作为参照；3 号比色皿中不加 H2O2作为控制参照；2号比色皿中加入0。1mmol/L H2O2 启动反应；40s 内每10s 连续记录室温下290 nm 紫外吸光值的变化。室温下每一分钟氧化1μmol AsA 的酶量作为一个酶活性单位（U）（吸光系数为2。8mmol/L cm）。重复3次。

（3）计算公式：

APX 酶活U = (A290×V总×1000×60×1000)/(2。8×V酶×T×W)

A290：测定的吸光值; V总：提取粗酶液总体积，5ml 粗酶液; 1000：将ml 转换成μl; 60：1 分钟60 秒; 1000：将mmol 转换成μmol; 2。8：吸光系数mmol/L cm; V酶：用50μl 酶液进行活性测定; T：每10 秒记录吸光值变化的时间；W：材料重量，2g。

1。3。5 丙二醛（MDA）含量文献综述

采用硫代巴比妥酸（TBA）显色法。

称取2g西葫芦组织，分次加入5ml 10%三氯乙酸（TCA）研磨至匀浆，装入离心管，在10000×g低温离心20min，吸取上清液转移到另一离心管。取2只带盖子的离心管，一只加2ml组织上清液，另一只管加2ml 10%三氯乙酸（对照）。两只管子中各加2ml 0。67%的硫代巴比妥酸（TBA）溶液，混匀，用胶布封住离心管盖，放入沸水浴中20min，自来水冷却(可再10000r/min的高速离心机中离心20min)。最后在722紫外分光光度计下进行比色，分别测定OD450、OD532、OD600值。重复测定3次，取平均值。

计算公式：

MDA的含量(μmol/g) =   [6。45×( OD532— OD600)—0。56 × OD450 ] × V总

                                         Vt × W × 1000

V总：提取液总体积(ml)；Vt ：测定时取样体积(ml)；W：样品重量(g)。

1。4 数据处理

将每个指标3个重复组测定数据，求平均值后，在EXCEL中进行数据处理、作图、计算和添加标准差。