摘  要 ：将里氏木霉木聚糖酶基因xyn与马克斯克鲁维酵母表达载体pKLAC1连接形成的重组载体pKLAC1-xyn导入大肠杆菌（Escherichia coli ）DH5α菌株，挑取阳性克隆，提取质粒，再将重组载体用ScaII 酶酶切，线性化后电转化马克斯克鲁维酵母（Kluyveromyces marxianus）GS115菌株，挑取多个阳性克隆，将重组菌株接入LB培养基中振荡培养，经过含 5 mmol /L 乙酰胺的 YCB 平板筛选后得到可以高效表达木聚糖酶的马克斯克鲁维酵母菌株。并对产物进行了酶活测定，结果表明里氏木霉木聚糖酶基因（xyn）在马克斯克鲁维酵母中成功表达。94079

毕业论文关键词：里氏木霉木聚糖酶，pKLAC1，马克斯克鲁维，表达

Abstract: The Trichoderma reesei xylanase gene xyn expression vector pKLAC1 is connected to the formation of recombinant vector pKLAC1-xyn into Escherichia coli and Kluyveromyces Marx (Escherichia coli) alpha DH5 strains, positive clones, extraction of plasmid, then the recombinant vector was digested by ScaII enzyme, the linear transformation Marx (Kluyveromyces marxianus) GS115 Kluyveromyces strain, were many positive clones, the recombinant strain LB culture medium access oscillation after YCB tablet, containing 5 mmol /L acetamide were obtained high expression of Marx Kluyveromyces strain xylanase。 The product structure was analyzed by enzyme activity determination, results showed that Trichoderma reesei xylanase gene (xyn) expression in Kluyveromyces in Marx。

Keywords：xylanase，pKLAC1，Kluyveromyces marxianus，expression

目录

1  前言 6

1。1  半纤维素酶概述及动态研究 6

1。2  木聚糖酶概述 7

1。3  马克斯克鲁维酵母概述 7

2  材料与方法 8

2。1  材料 8

2。1。1  质粒和菌株 8

2。1。2  主要仪器和设备 8

2。1。3  酶和主要试剂 9

2。2  方法 9

2。2。1 主要试剂及培养基的配置 9

2。2。2  目的基因的提取 9

2。2。3  目的基因与载体的结合 9

2。2。3。1  酶切 9

2。2。4  目的基因和表达载体的连接及克隆 11

2。2。4。1  的基因和表达载体的连接 11

2。2。5  重组子导入受体细胞 11

2。2。5。1  连接并转化大肠杆菌DH5α 11

2。2。5。2  重组子的线性化处理并回收 12

2。2。5。3  马克斯克鲁维菌株感受态的制备及电转化 12

2。2。5。3。1  制备方法 12

2。2。5。3。2  克鲁维菌株的电转化 12

2。2。5。4  FPA酶活力测定及蛋白纯化 13

3  结果与分析 13

3。1  目的基因的获取 13

3。2  表达质粒pKLACI的提取