2。6  土壤有机质的测定(重铬酸钾容量法)

    在加热的条件下，用过量的重铬酸钾—硫酸(K2Cr2O7－H2SO4)溶液，来氧化土壤有机质中的碳，Cr2O7-2等被还原成Cr+3，剩余的重铬酸钾(K2Cr2O7)用硫酸亚铁(FeSO4)标准溶液滴定，根据消耗的重铬酸钾量计算出有机碳量，再乘以常数1。724，即为土壤有机质量。其反应式为：

重铬酸钾—硫酸溶液与有机质作用：

2K2Cr2O7+3C+8H2SO4=2K2SO4+2Cr2(SO4)3+3CO2↑+8H2O

硫酸亚铁滴定剩余重铬酸钾的反应：文献综述

K2Cr2O7+6FeSO4＋7H2SO4=K2SO4＋Cr2(SO4)3+3Fe2(SO4)3+7H2O

     准确称取通过0。25mm筛孔的风干土样0。50g(精确至0。000lg)，置于硬质试管的底部(称样量根据有机质含量范围而定)，然后用自动调零滴定管准确加入10mL，0。40mol/L重铬酸钾—硫酸溶液，摇匀并在每个试管口插入l小玻璃漏斗。将试管逐一插入铁丝笼中，再将铁丝笼放入已在电炉上加热185℃～190℃的油浴锅中(预先加温)，使试管中的液面低于油面，要求放入后油浴温度控制在170℃～180℃，待试管中的内溶物沸腾时开始计时(加热时产生的CO2气泡不是真正的沸腾，只有在真正沸腾时才开始计算时间)。此时控制电炉温度，以免溶液剧烈沸腾。在此期间可以轻轻提起铁丝笼在油锅中晃动几次以使溶液温度均匀，并保持油温在170℃～180℃，5min后将铁丝笼从油浴锅中取出冷却，用废纸擦去试管外边的油(蜡)液。然后将试管内的消煮液及土壤残渣准确无误地转入250mL三角瓶，用水冲洗漏斗和试管、洗液并入三角瓶，使三角瓶内溶液总体积控制在50～60mL。加3-5滴邻菲啰啉指示剂，用0。20mol/L的硫酸亚铁标准溶液滴定剩余的重铬酸钾溶液，颜色变化由橙黄到蓝绿再到棕红。做每批分析样时都同时做空白试验。空白试验不加土壤，加0。50g纯净细砂，其它步骤与有土壤的相同。与此同时，再加上参试样[22]。

2。7  数据分析方法和软件

实验结果在Microsoft Excel中进行处理。

DNA提取及DGGE分析结果采用DNAstar和Cluster软件进行序列分析，下载最相似的菌株序列作为系统发育树的参考序列。然后采用MEGA软件，Neighbor-joining法构建系统发育树，自展数 (bootstrap)1000。