山羊肌肉差异表达miRNA表达规律分析(2)
动物肌肉发育是一个非常复杂的生物学过程，受多种转录因子、细胞信号分子的调控。近些年研究发现，micRNAs对于肌肉的发育调控同样具有重要的作用，且这些micRNAs具有一定物种间保守性和组织表达特异性[5]。现阶段有较多关于猪、牛、绵羊等家养动物肌肉miRNA的研究,发现大量miRNA普遍与它们的宿主基因共表达 [6]。Ｔ.Ｇ.ＭcＤaｎelｄ等[7]分离猪骨骼肌组织中的miRNA，结果显示miR－206等多个miRNA在骨骼肌中高表达。虽然已有研究者研究了山羊的乳腺和皮肤，并发现存在大量的miRNA，而有关山羊肌肉miRNA的研究却不太有报道[8 9]。本次作为试验羊的徐淮山羊为地方山羊，这类山羊属于肉皮兼用型，以性早熟、繁殖力高、板皮质量好而著称，但也有缺点，比如个体小、生长速度慢，所以要作为肉羊生产，还需提高其肉用性能[2]。本实验把已选定的10个miRNA作为研究靶标，通过反转录、Real-time quantitative PCR (Qrt-PCR)方法来分析徐淮山羊肌肉不同生长发育时期及其各组织中这10个miRNA的表达情况，相互比较后研究山羊生长发育过程中在肌肉中表达量高的miRNA，为进一步研究该高表达量的miRNA在参与山羊生长发育中的调控功能以及其靶基因提供基础资料。
1材料与方法
1.1实验动物及组织样品的采集
1.1.1试验动物样本来源
采集健康的徐淮山羊90天胎羊及6月龄青年羊背最长肌、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小肠等七个组织样品。样品采集后立即投入液氮速冻，之后转入-80度冰箱保存备用。
1.1. 2所需主要实验试剂
（1）Trizol：宝生物工程有限公司。
（2）荧光定量试剂盒：SYBR® Premix Ex TaqTM ((TliRNaseH Plus)，RR082A，宝生物工程有限公司。
（3）反转录试剂盒 PrimeScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)，RR047A，宝生物工程有限公司。
1.2 试验方法
1.2.1总RNA的提取及质量检测
采用Trizol法提取总RNA，将采集的徐淮山羊各组织样品剪取一小块（100mg左右），经过研钵研磨成组织匀浆，再在组织匀浆中加入Trizol试剂提取各组织中的总RNA，并将提取的RNA溶解于RNase-free水溶液中，用移液枪轻轻吹打，等到RNA沉淀完全溶解后放入-80℃冰箱内保存。用琼脂糖凝胶进行电泳来检测所提取的各组织RNA的质量。
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