茶树（Camellia sinensis）半胱氨酸蛋白酶抑制剂（Cystatin）抗体的制备及纯化 (3)
绪论图-2 茶树（Camellia sinensis）
一般来说，抗体具有特异性中和抗原、杀灭细菌、介导调理吞噬病毒、激活补体等免疫功能，从血清中提取抗体是最常见的方法之一。[21]本课题通过茶树Cystatin-福氏佐剂混合乳化作为抗原免疫小鼠获得抗血清，常见的免疫途径及优缺点，见绪论表-1。
绪论表-1常见免疫途径的优缺点[22]
途径 细节 优点 缺点 物种
皮下
（s.c.） 最常用优选途径，不要在捆绑固定的身体部位注射，注射点不要超过5个 可以注射相对大的体积，炎症过程易于监测 吸收慢 所有物种
肌肉注射
(i.m.) 骨骼肌血管丰富 快速吸收；特别是对大型动物，可以注射相对大的体积 注射到封闭空间，在肌肉中易引起疼痛；抗原和佐剂沿着界面和神经束扩散，易损伤神经或产生其他严重副作用 不推荐在啮齿动物中注射油性佐剂
腹腔
(i.p.) 抗原提呈的有效途径(由呼吸活动帮助转运，容易进入淋巴) 相对大的接种体积 注射失败率相对较高，油性佐剂易产生腹膜炎，增加注射过敏性休克风险 主要为啮齿动物
静脉
（i.v.） 不可溶性抗原不可用，抗原不推荐注射油性佐剂，抗原主要递送到脾脏，接着到淋巴结 抗原快速分布 增加注射过敏性休克风险 可用于所有物种，但仅为可溶性抗原
真皮
(i.d.) 每只动物免疫注射次数应少于5次 皮肤内高浓度树突状细胞快速递送抗原到淋巴结，少量抗原时即有效 使用油性佐剂引起溃疡 在啮齿动物中不推荐使用
采用腹腔注射免疫，免疫5周取血测效价，若达到理想值，即成功获得抗体。
茶树Cystatin抗体纯化简介
效价高的免疫血清对传染病的诊断与治疗、抗原分析、免疫球蛋白的鉴定以及其他研究有重要用途。[23]抗体纯化能够提高抗体纯度、效价，对抗体的后续使用具有重要意义。常见的抗体纯化方法如下[24]。
绪论表-2 常见的抗体纯化方法[24]
方法 容易程度 成本 适用性 特异性 主要用途 缺点 大样本纯化
硫酸铵/辛酸沉淀 非常容易 廉价 适用于所有血清和腹水，不适用培养上清 无 增加抗体的浓度 抗体纯度不高 可以
阴离子交换层析 稍有困难，必须知道抗体pH 中等廉价 适合大多数的抗体及亚型 无 适于去除非抗体蛋白、蛋白质A、DNA、内毒素反转录病毒。加样和洗涤过程中免疫球蛋白是可溶性的 对有些抗体纯化能力有限，DNA易与基质不可逆的结合 可以
阳离子交换层析 稍有困难，必须知道抗体pH 中等廉价 适合大多数的抗体及亚型 无 适于去除非抗体蛋白、蛋白质A。对免疫球蛋白有高结合力 对去除DNA及内毒素的效果中等。最佳结合条件可能会使某些免疫球蛋白沉淀。缓冲液会失效 可以
方法 容易程度 成本 适用性 特异性 主要用途 缺点 大样本纯化