日粮氮源与乳酸链球菌素对湖羊瘤胃发酵血液生化及氮平衡的影响(4)
1.4.3 瘤胃发酵参数：试验期第6和8周第7天早晨饲喂后（3h）用口腔采集瘤胃液的方法采集所有湖羊瘤胃液，用于发酵参数的分析：试验第6周和第8周，晨饲后3h经口腔使用负压导管采集瘤胃液，参照申军士等[9]方法将采集的瘤胃液充分搅拌后用四层纱布过滤，过滤后的瘤胃液用于发酵参数（pH值、VFA、NH3-N）的测定，其中，pH值应立即使用pH计测定，其余样品-20℃保存待测。参照Nyachoti等[10]描述的方法，使用氯化铵作为标准品，利用比色法测定氨氮浓度。另取瘤胃液1 mL于加有0.2 mL偏磷酸巴豆酸混合液的2 mL离心管中，冻存于-20℃，用于挥发性脂肪酸测定；参照申军士等[9]方法，流水解冻后9000 g的离心力条件下离心10 min，取上清液通过0.22 μm针式滤器过滤，溶剂为乙醚，使用气相色谱仪（美国，安捷伦，7890A）测定挥发性脂肪酸；测定条件，进样口温度：220℃，柱箱温度：150℃，检测器温度：250℃，分流比：30:1。
1.4.4 血液生化指标：试验期第6和8周第6天早晨饲喂后3h间对所有试验湖羊进行颈静脉釆血10ml，3000rpm离心15分钟分离血浆，取血浆于-20℃下保存待测。胆固醇、三酰甘油、碱性磷酸酶、葡萄糖、血尿氮、白蛋白、球蛋白（Globulin）、肌酸酐、尿酸等指标利用全自动生化分析仪测定。
1.4.5 尿样：试验期第9周点收样法（10:00和16:00）连续三天采集每只湖羊尿样共计20 mL/只，并立即按1:1比例加入6M盐酸酸化，用于氮平衡（利用率与排放率）分析，样品于-20℃保存待测。根据尿中肌酐作为内源指示剂估计尿排放量 [11]。尿肌酐一天的排放量因动物种类和体重而不同，同一种动物尿液肌酐排放量与体重0.75为恒定系数，育肥羊为0.33mmol/kg BW0.75。使用南京建成肌酐测试盒（苦酸法，南京建成赛浩科技有限公司，货号C011-1）测定尿液肌酐浓度。排尿量=0.33*BW0.75／肌酐浓度。尿N排放量=排尿量*尿中N百分含量%。
1.5 统计分析
试验所得数据经Excel初步处理后，采用利用SAS 9.2广义线性模型（GLM）对所有指标进行方差分析和显著性分析，多重比较采用Duncan法，P < 0.05表示差异显著。
2 结果与分析
2.1 日粮氮源和乳酸链球菌素对湖羊瘤胃发酵的影响
由表2的数据可见，在不同日粮氮源条件下（豆粕和DDGS），在日粮中添加乳酸链球菌素对湖羊瘤胃的PH值、乙酸、丁酸、戊酸、异丁酸等均无显著影响（P > 0.05）。
DDGS作为氮源显著降低瘤胃乙酸、丁酸、异丁酸、异戊酸以及乙酸／丙酸比（P < 0.05），总挥发酸有降低的趋势（P = 0.05），而对丙酸和戊酸无显著影响（P > 0.05）。