长江刀鲚洄游过程中消化酶活性的初步研究(2)
消化酶是指由消化系统和消化腺分泌的，起营养和消化作用的酶类。研究表明，不同的消化酶在鱼类各消化器官内的分布存在差异，同一种酶在不同消化器官中的分布也存在明显的差异。影响消化酶的因素主要分为两种，内源性因素和外源性因素，内源性因素主要是鱼的食性和鱼的生长阶段，随着鱼类的生长，消化系统不断发育，内分泌机能不断完善，消化酶活性也随之变化，消化酶活性发生量变的关键时期则是在仔鱼内源性营养向外源性营养的转换期以及仔鱼向稚鱼的转变期。外源性因素主要有环境温度和饵料因素。饲料成分对消化酶活性的影响在不同的实验研究中表现出很大差异。张家国等[24]报道,饲料中不同蛋白能量水平显著影响草鱼肠道中蛋白酶、淀粉酶活力,而对肝胰脏内蛋白酶、肠道脂肪酶的活性无影响;李广丽等[16]发现,随着饲料蛋白质水平的升高,草鱼、鲤鱼肝胰脏中胰蛋白酶活性显著升高,而总肠变化不显著;黎军胜等[17]以不同蛋白能量水平的饲料喂养奥尼罗非鱼发现,肝胰脏和肠道蛋白酶活性变化差异不显著,淀粉酶和脂肪酶活性会随饲料成分变化产生显著变化。环境温度条件的改变对鱼类的生理活动的影响是多方面的,可以引起鱼体本身的生长和内分泌机能的状态发生变动,同时也引起消化酶活力和组成发生一定的改变。陈品健等[18]研究了夏冬两季真鲷仔、稚、幼鱼消化酶的活性,发现蛋白酶和淀粉酶的比活力冬季明显低于夏季,而脂肪酶活性冬季明显高于夏季,且一直文持在相对稳定的水平。黎军胜等[17]报道在水温17～ 32°C时,罗非鱼消化酶活性均随环境温度升高而提高。陈品健等[19]研究了真鲷(Pagrosomusmajor)幼鱼消化酶活性与温度的关系,认为饲养温度除了直接影响酶的活性外,还通过调节机体的代谢,改变体内的离子浓度、pH值等,从而间接的影响了酶的活性。
鱼类消化酶可分为四种，淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶和纤文素酶，本课题主要选择其中的三种淀粉酶、脂肪酶和胃蛋白酶的酶活力适应性变化做研究。
1 材料与方法
1.1江段设置和样本采集
在长江中下游及河口区设置安庆、当涂、镇江、南通4个江段，并以所在地名命名江段。本实验采样分两个时间段进行，即2016年6月份和2016年8月份，自上而下按序对各江段进行刀鲚样本采集，分别在安庆、当涂、镇江、南通采集样本，每次采样数量为50尾。
1.2样本处理
1.2.1生物学测定
用显数游标卡尺对各江段采集的刀鲚样本进行全长和体长的测量，并称量体重，对完成生物学指标的刀鲚依次编号后保存于- 20℃冰箱。
1.2.2酶液的制备
将冷冻的试验鱼从- 20℃中取出自然解冻，再置于冰盘上解剖，取出肝脏、肠道、胃，剔除内容物和脂肪后，用 0. 9% 预冷的生理盐水快速冲洗，并用滤纸吸干水分。将分批解剖获得的各组织保存于-80 ℃冰箱中，测定前先在冰盘内将样品剪碎，称取一定量的组织于玻璃匀浆器中，加入一定体积预冷的生理盐水后，在冰浴条件下匀浆。所得匀浆液于 4 ℃下以 2500 r/min 离心 20 min，取上清液作为酶液，冰浴保存。
1.2.3酶活力测定
采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒测定胃蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶。胃蛋白酶(Pepsin，PPS)活力定义为: 在PH为8.0、37 ℃条件下每毫克组织蛋白中含有的胃蛋白酶每分钟使吸光度变化0.003即为一个PPS酶活力单位(U)。淀粉酶(Amylase，AMS)活力定义为:在 37℃ 条件下每毫克组织蛋白与底物作用30 min，水解10 mg淀粉定义为一个AMS酶活力单位(U)。脂肪酶(Lipase，LPS)活力定义为: 在 37 ℃条件下每克组织蛋白在本反应体系中与底物反应1分钟，每消耗1 μmol底物为一个LPS酶活力单位(U)。