基于颖果发育进程的杂草稻早熟机制的研究(3)
表1供试杂草稻与栽培稻采集信息以及生物学性状
Table 1 The collecting information and biological characteristics of the weedy and cultivated rice
样品区域 采集地 经度 纬度 品种名 类型
Area Collected site Longitude Latitude Biotype Subspecies
东北 丹东, 辽宁 124°17'E 39°58'N 丹粳17号（CR-DD） 粳型栽培稻
WRLN004（WR-DD） 粳型杂草稻
华南 茂名, 广东 110°50'E 21°40'N 粤新占2号（CR-MM） 籼型栽培稻
WRGD008（WR-MM） 籼型杂草稻
华东 扬州, 江苏 119°20'E 32°20'N 中莲恢950（CR-YZ） 籼型栽培稻
WRJS023（WR-YZ） 籼型杂草稻
泰州, 江苏 119°57'E 32°26'N 南粳5055（CR-TZ） 粳型栽培稻
WRJS013（WR-TZ） 籼型杂草稻
WR-DD：丹东杂草稻；CR-DD:丹东栽培稻；WR-MM：茂名杂草稻；CR-MM：茂名栽培稻；WR-YZ：扬州杂草稻；CR-YZ：扬州栽培稻； WR-TZ：泰州杂草稻；CR-TZ：泰州栽培稻。
WR-DD: weedy rice from Dandong;CR-DD: cultivated rice from Dandong; WR- MM: weedy rice from Maoming; CR-MM: cultivated rice from Maoming; WR-YZ: weedy rice from Yangzhou; CR-YZ: cultivated rice from Yangzhou; WR-TZ: weedy rice from Taizhou; CR-TZ: cultivated rice from Taizhou.
1.2 试验方法
1.2.1杂草稻与栽培稻颖果显微结构的观察
采取杂草稻与栽培稻花后不同天数的籽粒（3d、5d、7d、9d）至少10粒，小心去除颖壳后，迅速固定于FAA固定液(50%无水乙醇：福尔马林：冰醋酸：甘油=89:5:6:5)中。花后7d和9d的颖果用双面刀片切成厚约2mm的小段再固定。固定材料真空泵抽气24h以上， 4℃保存。
参考康海岐（2008）[28]的方法，制作石蜡切片，具体步骤如下：脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、展片、粘片和染色。染色剂为Fasga染液，染色时间：10 min。
在显微镜（ZEISS AxioCam-HRc）下观察杂草稻与栽培稻胚乳的胚乳切片并拍照，比较杂草稻与栽培稻的胚乳发育过程的差异。
1.2.2杂草稻与栽培稻胚乳细胞活性的检测
取花后不同天数（3d、5d、7d、9d、11d、13d、15d、18d、21d）的颖果剥去颖壳，为实验材料。
TTC 染色：参考郑光华（1990）[29]的方法，，颖果用锋利的双面刀片剖开, 浸入到 0.5% TTC 染色液中，25℃室温下半小时后取出，在解剖镜下观察，并拍照。染成红色的部位为脱氢酶活性高，细胞呼吸旺盛的地方。
Evans blue 染色：参考Young &Gallie( 1992)[30]的方法，颖果用锋利的双面刀片剖开，置于 0.1% 的 Evans blue 的水溶液中浸染 2-3 min，再以自来水浸洗 1h，在解剖镜下观察，并拍照。被染成蓝色的部位为死细胞。