越南青冈和毛叶青冈苗期生长和生理特性比较(4)
2.材料与方法
2.1实验材料
实验所用越南青冈、毛叶青冈种子采集于云南地区，海拔高度在500-700米的山地沟谷雨林中。采集时间为2011年9月。种子采集后，经过浮选后于阴凉处晾干，在4℃种子冷藏柜中贮存至2011年10月。并于10月21日进行播种。
2.2实验方法
2.2.1越南青冈及毛叶青冈种子育苗试验
（1） 种子千粒重计算
分别随机选取越南青冈和毛叶青冈100粒大小重量不等的种子，各分为5组，利用电子天平，分别对每组20粒种子进行称重，记录数据后，得出平均值再乘以1000，最终得出种子的千粒重。
（2） 种子育苗
将种子进行播种育苗，以相同的水、肥、气、热等环境下进行培育。并统计出苗率。
2.2.2越南青冈与毛叶青冈苗期基本生长量（株高、叶片数、茎粗）
（1） 幼苗的移盆
将成活的幼苗以相同基质种植在花盆中，按光照的强弱分为两组
A组：强光（苗床上，最大光强530μmol•m-2•s-1）
B组：弱光（苗床下，最大光强150μmol•m-2•s-1）
（2）每个月分别测定其生长量相关数据
利用尺子和游标卡尺分别测量越南青冈与毛叶青冈每组的株高、茎粗，数得叶片数。并记录算得平均数
2.2.3叶绿素含量测定
（1）取新鲜的越南青冈及毛叶青冈叶片,擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀。称取剪碎的新鲜样品0.2g，共3份，分别放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及2～3ml95％乙醇，研成均浆，再加乙醇10ml，继续研磨至组织变白。静置3～5min。
（2）取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。
（3）用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至25ml，摇匀。
（4）把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以95％乙醇为空白。使用752型紫外可见分光光度计分别在663 nm 和645 nm 波长下测定浸提液吸光度值D663 和D645。依下列公式计算：
叶绿素a 浓度(Ca)=12.7D663- 2.69D645；
叶绿素b 浓度(Cb)=22.9D645- 4.68D663；
叶绿素含量=C•V/S，式中，C 为浓度；V 为体
积；S 为样品质量。
2.2.4气孔密度
（1）将植物叶片展开，清除表面灰尘(若表面有水，用吸水纸吸干)；
（2）将指甲油均匀地在叶片表面涂一薄层，自然晾干；
（3）用镊子镊取叶面上已形成的指甲油薄膜一小片，放至加有一小滴水的载玻片上，借水的表面张力，将薄膜自然展开；盖上盖玻片，置显微镜下即可观察。
（4）测定气孔数目及密度。将新鲜叶子上（或下）表皮制片，置于显微镜下计算视野中气孔的数目（用低倍镜还是用高倍镜，决定于表皮上气孔的数目），移动制片，在表皮的不同部位进行5-6次计数，求其平均值。随后用物镜测微尺量得视野的直径，则半径r为已知，按公式S=r2(S为视野面积)计算视野面积，用视野中气孔的平均数/视野面积，即可求出气孔的密度，以“气孔数/mm2”表示。
2.2.5叶绿素荧光和快速光响应曲线的测定
选取长势良好的健康枝条自顶叶下第 3 ～ 6 片健康叶作为测量对象，所有的叶绿素荧光参数的测量都用脉冲调制式叶绿素荧光仪 PAM-2500( Walz GmbH，EFFeltrich，Germany) 完成。
选取待测品种顶生第4位完全展开叶片,经过30 min充分暗适应,用小于0•05μmol•m-2•s-1的测量光照射叶片,测得初始荧光(Fo),随后施加饱和脉冲光(8 000, 0.8 s),测得最大荧光(Fm)。并由Fo、Fm计算可变荧光(Fv),暗适应叶片PSⅡ最大光化学效率(Fv/Fm), PSⅡ潜在光化学效率(Fv/Fo)[10]。
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