独角金内酯(SL)对菊花蚜虫取食行为的影响(3)
独脚金内酯（Strigolactone，SL）作为一类新型植物激素，调控多种发育过程，有关独脚金内酯抗逆性研究近来日益增多，拟南芥MAX2突变体比WT植物蒸发更多的水，显示出对干旱胁迫高度敏感，SL合成基因在这些应答中没有出现缺陷，而ABA、干旱敏感、渗透胁迫都受MAX2限制[10]，这说明MAX2在非生物胁迫中扮演者重要角色。Ha等人表明拟南芥MAX3和MAX4突变体也对干旱和盐胁迫敏感，与WT植物相比，表现出较高的叶气孔密度和延迟ABA诱导气孔关闭[11]。而有关独角金内酯与蚜虫的抗性的相关性尚未见报道，有关其调控抗逆性方面的研究方始起步，已知ABA参与SL调控的耐旱性，且ABA在SA和JA调控的抗虫性防御路径的平衡中起着关键的作用[12-13]，推测SL可能与植物的抗蚜性相关。本研究的实施明确独角金内酯（SL）对菊花蚜虫取食行为的影响，为探讨SL在菊花抗蚜虫方向打下基础，为菊花新品种培育提供重要的理论依据。对减少切花菊蚜虫危害、降低生产成本、提高品质与产量、减少环境污染具有重要意义。
1 材料
1．1材料
1．1．1 生物材料 供试材料‘神马’来自于南京农业大学“中国菊花种质资源保存中心”；CmCCD8超表达株系OX-1, OX-2由南京农业大学菊花课题组实验室提供。（选取生长健壮、长势一致的扦插苗定植在1:1:1的蛭石、珍珠岩和营养土中，培养条件：温度22℃，光周期16 h/8 h光照/黑暗，光强度为100 µmol m-2 sec-1）；选取个头一致的二龄菊姬长管蚜。
1．1．2 化学试剂 本研究所用的植物激素GR24购自http://www.chiralix.com/。
1．2方法
1．2．1外源GR24处理 采用丙酮配制GR24母液，使用前用去离子水稀释至相应的处理浓度：1、5、10、20 μΜ GR24，并加入适量的Triton X-100使其终浓度为0.1%；以喷施含有0.1%丙酮+0.1% Triton X-100的去离子水作对照。每个浓度处理20株，重复3次。
1．2．2蚜虫接种试验 选取长势一致、6-8叶龄的野生型与转基因植株作为蚜虫接种材料。将两龄若虫饥饿处理4h后，接种在植株自顶部往下第二、三片完全展开叶上，每株接种5头，接种后用罩子（0.1 mm厚的透明聚酯片制成的圆筒，高度25-30 cm；直径12 cm）将植株罩住，顶端用纱布封住，防止蚜虫逃逸。
1．2．3蚜口数目统计 自蚜虫接种后第3d开始统计，之后每隔1d统计一次，连续统3周。蚜口数量统计参照Deng [14]的方法，抗蚜性用繁殖倍数（multiplication rate, MR）进行衡量。MR = Ni/5，Ni是调查当天的蚜口数；蚜虫抑制率（Inhibition ratio relative，IR）=（Nz - Nh）/ Nz x 100，Nz是母对照植株蚜虫数，Nh是转基因植株蚜虫数。
1．2．4蚜虫取食刺吸电位检测 采用8通道Giga-8 EPG（electrical penetration graph, EPG）系统对无翅菊姬长管蚜取食活动进行EPG监测（Giga-4/8 EPG systems, WF Tjallingii, Wageningen, the Netherlands）。将二龄菊管长姬蚜置于野生型和两个转基因株系自顶端往下第三片完全展开叶的正面，蚜虫在处理前需进行4 h的饥饿处理。用带银胶直径为20 µm、长35 mm的金丝粘住蚜虫的前胸背板上作为记录电极；将粘有金丝的菊管长姬蚜置于叶背上，每个株系包括5株重复，每株记录6头蚜虫的EPG图谱。EPG记录菊管长姬蚜6 h的取食活动，每4 s记录一次形成波形。实验重复五次。
1．2．5“Y”型嗅觉仪——蚜虫驱避性试验 选取6-8叶龄幼苗作为“Y”型嗅觉仪试验的材料。实验分2个实验组：GR24处理的野生型‘神马’与溶解对照组，CmCCD8超表达植株与野生型比较组。“Y”型嗅觉仪为聚四氟乙烯材料构成，且配以可移动玻璃盖板。试验开始前，以乙醇清洗所有组件。为增加空气洁净度和湿度，“Y”管2臂先经过活性炭过滤，然后再通入蒸馏水瓶，两臂的空气流速为100 mL•min-1（数码流量计控制）；同时行为测试区的中心管臂通过真空泵以200 mL•min-1的流速向外抽气，使行为测试区的空气保持由两臂向中心管臂的定向流动。取饥饿处理4 h后的两龄若虫，将其送入“Y”型管中心管臂的分叉处，每棵植株观察20头蚜虫且作为一次重复，重复3次，共试验60头蚜虫。当蚜虫行至“Y”型管两臂且距离分叉口3 cm处则记为有效选择，若蚜虫在15 min内仍未做出选择则记为不选择。
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