海狸磁珠固定化腈水解酶及其催化水解1-氰基-环己基乙腈的研究(4)
1.8磁性微球固定化研究现状
徐英摄等用羟基SiO2为壳包裹Fe304、，再以戊二醛和氨基硅烷化试剂作为为交连试剂固定化了Alcalase酶，并将其用于酪蛋白的水解过程[26]。吴文兵等采用实验室自制氨基磁性微球固定化木瓜蛋白酶，并将其应用于啤酒中蛋白质的水解[27]。与自由酶比较，目定化胃蛋白酶的催化特性和稳定性均令人满意[28]。Guo等通过物理吸附法将脂肪酶CCL固定Fe3O4/(DVB-VA)磁性微球上，并研究了该固定化脂肪酶在各种反应体系下的催化酯化反应，结果表明固定化脂肪酶显示了较强的活性和优良的重复利用性[29]。陈文颖等用将无机磁性粒子Fe3O4与有机材料海藻酸钠结合起来制成一种复合的磁性微粒，并将其进行表面修饰，通过化学共价法来固定青霉素G酰化酶，重复催化研究结果表明，固定化酶具有比游离酶更广泛的温度及pH值适用范围，并且具有良好的热稳定性、可循环使用性和贮存稳定性[30]。Lei等将表面含羧基的磁性高分子微球经亚硫酰氯活化后，在其表面形成酰氯基，该基团可以很容易地与酶分子中的氨基结合形成肽键，从而制得磁性微球固定化酶[31]。Y Yong等用悬浮聚合法制备磁性微粒，并借助甲氧基对假丝酵母脂肪酶进行了固定化，研究表明：固定化酶与游离酶相比具有更广泛的pH适用范围、可循环使用性和贮藏稳定性[32]。Zeng等利用单体硅酸四乙酯与氨丙基三甲硅烷在磁性微粒表面的共聚反应，制得了MS-type树脂，再分别用吸附法和戊二醛交联法固定脂肪酶PPL，并对其理化性质进行了对比，结果表明，利用交联法固定脂肪酶PPL的各种理化性质最为理想[33]。杨婉身等以包被Fe3O4/SiO2复合纳米磁球为核，使用硅烷化试剂(APTES)制备了氨基磁性微球，结果表明，其粒径大小约为40nm，饱和磁化强度50emu/g，具有超顺磁性；粒子表面富含氨基，并将此微球进行了葡聚糖内切酶和木瓜蛋白酶的固定化，其酶学性质和动力学参数都有改观[34]。
1.9 研究的意义和内容
1.9.1研究意义
在酶的催化作用下一些很难进行的化学反应也可顺利地进行反应，它可以在温和条件下进行催化反应，而且反应底物专一性强、副反应少等优点使得人们对酶的应用和技术的研究不断深入。酶制剂产品的应用被限制是因为酶的反应后有难以回收、环境敏感等缺点，而酶被固定化后性质更稳定，且易于和产物分离，可多次使用，这些优势使得固定化酶在许多领域广泛运用。
1.9.2研究内容
配制培养基，从而培养大肠杆菌，将培育好的大肠杆菌中超声破碎离心，取其上清液，即得到粗酶提取液，并测定其活酶性。通过共价结合法将腈水解酶与海狸磁珠结合，使其成为具有易分离回收，可多次使用的固定化酶。本文将研究磁珠固定化量，酶的固定化量，pH值，温度因素等对固定化酶的影响，并与游离的腈水解酶对比。
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