大丽花繁育特性的初步研究(2)
近年来，关于大丽花的研究报道不多，有关大丽花名优品种的引种栽培、规模化生产技术研究、观赏特征与品种分类[3]、优良品种扦插繁殖[4]、表型性状遗传多样性[5]、干旱胁迫的影响[6]、花芽分化[7]等已有部分报道，但对大丽花的花粉萌发、储藏等方面的繁育特性研究还未见到相关报道。
目前，已有很多文献发表了关于菊科植物花粉活力的研究，包括冷蒿、野菊等[8][9]，但对大丽花花粉生活力的测定研究很少。花粉生活力测定方法常用的有:花粉离体萌发、核及原生质染色、酶测试及荧光染色法，其中花粉离体萌发法更接近于自然实际情况，而且这种方法还为试管授精以克服不亲和性[10][11]，通过花粉进行基因转移等高新技术研究奠定了基础[12]。笔者采用大丽花花粉,利用离体萌发法,研究PEG、硼酸、蔗糖和萌发温度对及花粉萌发的影响,以期探索出适合大丽花花粉萌发的培养基, 并测得了62个大丽花品种的花粉萌发率，以期为大丽花花粉生活力的测定、人工授粉、栽培、育种、引种等研究提供理论基础。
1.材料与方法
1.1试验材料
试验于2016年9月～11月的大丽花盛花期进行，以南京农业大学锁石村菊花花卉基地的62个大丽花品种（见表5）为试验材料。于晴天的10点至14点随机地选取盛花期发育良好、长势健壮、且没有病虫害的大丽花植株，采集即将花药开裂的花朵。使用镊子采集花药，将花药置于硫酸纸上，放置通风处光照一段时间后，将硫酸纸铺开，花粉便会自然地散落于纸上。散落的大丽花花粉用离心管收集起来备用[13]，也可以直接用毛笔刷取出新鲜的花粉，在28℃的烘箱中干燥4～8小时[14]。如在野外不方便采集花粉时，也可以摘取含苞待放或者是初开的花朵，连同一段长度适中并带有叶片的枝条，放入盛有清水的瓶子中，带回实验室后待大丽花散粉时再收集花粉[15]。
1.2 试验方法
1．2．1 花粉萌发培养基的筛选 以花粉量较多的大丽花‘十字架’为试验材料，采用花粉离体萌发的方法测定花粉萌发率以筛选最适合的培养基配比。BK培养基（0.01%H3BO3、0.03%Ca(NO3)2•4H2O、MgSO4•7H20、0.01%KNO3)作为基本培养基，添加不同浓度的PEG、蔗糖、硼酸，以筛选最适合大丽花花粉萌发的培养基。
不同PEG浓度处理：BK培养基+PEG，PEG的浓度为0、5%、10%、15%；
不同蔗糖浓度处理：BK培养基+蔗糖，蔗糖的浓度为2%、4%、6%、8%、15%；
不同硼酸浓度处理：BK培养基+最适蔗糖浓度+硼酸，硼酸的浓度为0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%；
蔗糖、硼酸、PEG组合处理：BK培养基+最适蔗糖浓度+最适硼酸浓度+PEG，PEG的浓度为0、5%、10%、15%。
液体培养基可直接配置，将配好的培养基滴在载玻片上，将花粉散播其上，为避免水分蒸发造成误差过大,应尽可能增大培养环境的空气湿度[16]。测定花粉的生活力，花粉萌发率最高的即为筛选出的最适大丽花花粉萌发培养基，花粉生活力的测定方法、操作步骤、培养条件和时间同下述1.2.3花粉离体培养方法。
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