乙烯和生长素在番茄果实形成过程中互作的探究(2)
3．2 EIL1对生长素的影响 8
3．3 硝酸银处理模拟EIL共抑制 9
3．4 讨论与展望 9
致谢 10
参考文献： 10
图 1 番茄EIL1在果实中的表达模式 4
图2 野生型及转基因番茄植株 4
图3 野生型与EIL1转基因番茄果实 5
图4 野生型及EIL1转基因番茄内源生长素含量测定 5
图5 野生型及EIL1转基因番茄植株开花前子房显微切片 6
图6 野生型与各转基因番茄不同时期花蕾GUS染色观察 8
乙烯和生长素在番茄果实形成过程中互作的探究
引言：番茄是植物遗传研究中重要的模式植物，番茄作为典型的呼吸跃变型果实，果实的成熟受乙烯的调控，外源乙烯处理番茄果实能促进番茄红素的形成，提高多聚半乳糖醛酸酶活性[1]，有效促进果实的成熟。另外，乙烯还能促进叶片的衰老和脱落，促进某些植物开花而抑制另一些植物开花，促进根毛的发生[2]和导致叶片向上生长。作为在植物全生长发育过程中都起重要作用的激素——生长素，不仅影响植物根茎的生长与发育，文管组织形成等，而且对果实的发育起着重要作用。越来越多的研究显示两者在植物生长发育过程中有着许多的关联。比如乙烯促进根毛的发生过程中就需要生长素的参与[3,4]；乙烯与生长素在拟南芥下胚轴的伸长过程中也有着复杂的互作关系[5]；乙烯与光信号通过HLS1基因来调节生长反应以控制拟南芥幼苗顶钩的形成[6,7]；两者之间还能促进对方合成[8,9]。EIL1作为乙烯信号转导途径上关键的转录因子EIL3/EIL蛋白家族中的一员，能够参与调控一系列的乙烯应答反应。在对番茄EIL1基因的研究过程中，番茄EIL1基因超表达株系被发现果实存在早熟的现象，而共抑制转基因株系则形成了无籽果实且叶片表现出向地性[10]，我们知道生长素能引起典型的单性结实现象[11]和叶片向上性或向地性[12]，因此推测该过程有生长素的参与。
本研究通过对EIL1转基因番茄果实发育的过程中生长素的表达的定性实验和坐果后生长素含量的定量测定，来确定EIL1蛋白在番茄果实发育过程的中的时空表达特征和EIL1基因对生长素代谢的影响，揭示乙烯和生长素在果实形成过程中的互作关系。
1 材料与方法
1．1 试验材料
本实验在南京农业大学生科楼实验大棚完成，野生型番茄（Solanum lycopersicum，cv Micro Tom）、EIL1-OX转基因番茄、DR5-GUS转基因番茄和Promoter-EIL1-GUS转基因番茄种子，均由南京农业大学葫芦科作物遗传与种质创新实验室提供。
1．2 EIL1-OX/DR5-GUS转基因番茄的培养
取EIL1-OX转基因番茄种子和DR5-GUS转基因番茄种子各10粒分别培养，以EIL1-OX转基因番茄为父本，DR5-GUS转基因番茄为母本于花期进行人工杂交并进行套袋处理，成熟后获得杂交种EIL1-OX/DR5-GUS。
1．3 转基因植株表型观察及取样
○1取EIL1-OX转基因番茄、DR5-GUS转基因番茄、EIL1-OX/DR5-GUS转基因番茄、野生型番茄种子（对照）各10粒，于2016.4.17用55℃温水浸种处理、催芽。两天后移栽至泥炭培养基质中并放入光照培养箱中培养，培养条件为白天28℃、相对湿度75%，夜间25℃、相对湿度75%。一周后转入大棚在自然条件下培养。选取5株DR5-GUS转基因番茄前于开花前以500mg/L的AgNO3溶液处理，处理方式为用溶液喷施植株叶面两次，每次间隔一周。2016.4.25植株开始陆续进入蕾期，取样时分别取长度小于1mm，2-3mm，大于5mm花蕾和当天开花花蕾各总共10个，整个取样过程持续到2016.5.20完成。取花蕾期、开花期、幼果期、绿熟期、破色期的果实各3个置于冰上保存。