不同叶龄玉米叶片对DNA质量的影响和条件优化(3)
1.4核酸和蛋白质复合物的分离
常采用的去除蛋白的方法有3种：①把核蛋白溶液，用含异戊醇或辛醇的氯仿振荡使核蛋白乳化，然后离心核蛋白溶液就可以除去变性的蛋白质。此时在水相和氯仿相中间有蛋白质凝胶停留，而上层水相中存在的是DNA。将DNA钠盐用两倍体积95％乙醇溶液沉淀出来。若用冰乙酸或酸性乙醇来沉淀DNA钠盐，得到的是游离的DNA。②蛋白质可以被十二烷基硫酸钠(SDS)等去污剂处理后变性，与核酸分离，从而从材料中直接提取出DNA。③用苯酚处理，然后离心分层，DNA或溶于上层水相，或存在于中间残留物中，蛋白变性后则停留在酚层内。吸出上面水层，将其注入两倍体积的95％乙醇溶液中，得到白色纤文状DNA沉淀。反复使用上述方法多次处理DNA核蛋白溶液，就能将蛋白等杂质较彻底地除去，得到较纯的DNA制品。
1.5去除多糖常用的方法
高盐法：用乙醇沉淀时，把1/2体积的5M Na CL加入溶液中，多糖可被高盐溶解；用多糖水解酶将多糖降解；在提取缓冲液中加一定量的氯苯(1/2体积)，氯苯可以与多糖的羟基作用，从而去除多糖 ；用PEG 8000代替乙醇沉淀DNA：在500μL DNA液中加入200μL20% PEG 8000 (含1.2 M Na Cl) ，冰浴20min。
1.6去除多酚常用的方法
为防止酚类试剂的氧化在抽提液中加入：β-巯基乙醇、抗坏血酸、半胱氨酸、等。加入比较容易与酚类反应的试剂：如PVP、PEG，酚类与PVP、PEG的亲和力较强，可有效的避免酚类与DNA的结合。
1.7去除RNA
为了彻底除去DNA制品中混杂的RNA，可用RNA酶处理。
2.材料和方法
2.1材料
不同叶龄的玉米叶片：幼苗、幼嫩叶、成熟叶。
2.2仪器
电子天平、恒温水浴锅、冰箱、离心机、电泳仪、电泳槽、梳子、紫外可见分光光度计、凝胶成像系统、离心管、移液枪、研钵、烧杯、容量瓶等。
2.3试剂
2.3.1提取试剂
CTAB提取缓冲液、SDS提取缓冲液、裂解液、TE缓冲液、75%乙醇、液氮、氯仿-异戊醇（24:1；V/V）、异丙醇、5MKAc(1/10V)。
2.3.2紫外可见分光光度计分析试剂
无菌水：去离子水121℃高温灭菌20min,备用、TE缓冲液。
2.3.3凝胶琼脂电泳所用试剂
O.5×TAE电泳缓冲液 、6×加样缓冲液、10mg/ml 溴化乙锭溶液、琼脂糖。
2.4材料处理
种植玉米，取玉米的幼苗、幼嫩叶、成熟叶1g，用纱布擦洗干净，用剪刀剪成小片于研钵中，加入液氮，研磨均匀。分别采取CTAB法和SDS法提取玉米叶片的DNA。
2.5 DNA提取方法
2.5.1CTAB法提去DNA
（1）将玉米叶片洗净，用75%的乙醇在其表面消毒，用去离子水冲洗3次本文来自优尔/文(论"文?网，毕业论文 www.youerw.com 加7位QQ324~9114找原文。取玉米的不同叶龄叶片1g于研钵中，用液氮研磨成粉末，将粉末迅速转移到离心管中；
（2）加入适量CTAB缓冲液，并轻轻混匀，置于65℃热水浴中保温1h(每20min颠倒摇匀一次)；
（3）将离心管取出后加入等体积的氯仿-异戊醇（体积比为24:1）抽提，轻轻颠倒混匀10次以上；