马疫链球菌IMF401发酵生产透明质酸的提取工艺研究 (2)
2.1 引言 12
2.2 材料与方法 12
2.2.1 主要设备仪器 12
2.2.2 主要试剂 12
2.3 实验方法 13
2.3.1 葡萄醛酸含量测定 13
2.3.2 分子量测定 14
2.3.3 蛋白质含量的测定 15
2.3.4 预处理液PH的选择 15
2.3.5 预处理温度的选择 15
2.3.6 助滤剂（硅藻土）种类的选择 15
2.3.7 滤纸板（滤膜）的选择 16
2.3.8 助滤剂（硅藻土）用量的选择 16
2.3.9 正交实验及验证实验 17
2.4结果与讨论 18
2.4.1 葡萄糖醛酸标准曲线 18
2.4.2 蛋白质标准曲线 18
2.4.3 预处理液pH的选择 19
2.4.4 预处理温度的选择 19
2.4.5 助滤剂（硅藻土）种类的选择 19
2.4.6 滤纸板（滤膜）的选择 20
2.4.7 助滤剂（硅藻土）用量的选择 21
2.4.8 正交实验 21
2.5 本章小结 23
第三章 透明质酸钠粗品的后期提纯条件优化 24
3.1 引言 24
3.2 材料与方法 24
3.2.1 主要设备仪器 24
3.2.2 主要试剂 24
3.3 实验方法 25
3.3.1 葡萄醛酸含量测定： 25
3.3.2 分子量测定 25
3.3.3 蛋白质含量的测定 25
3.3.4 活性炭处理温度 25
3.3.5 活性炭用量 25
3.3.6 活性炭处理时间 26
3.3.7 成品处理 26
3.4 结果与讨论 26
3.4.1 葡萄糖醛酸标准曲线 26
3.4.2 蛋白质标准曲线 26
3.4.3 活性炭处理温度 26
3.4.4 活性炭用量 27
3.4.5 活性炭处理时间 27
3.4.6 成品检测结果 28
3.5本章小结 28
第四章 主要结论 30
致谢 31
参考文献 32
第一章 前言
1.1 透明质酸的结构、分布和性质
1.1.1 透明质酸的结构
透明质酸( hyaluronic acid，HA)是由2000-25000个N-乙酰葡萄糖胺和葡萄糖醛酸通过β-l,4和β-l,3 糖苷键反复交替连接而成的酸性黏多糖。分子量在105-107D[3]之间，分子式为(C14H21NO11)n。HA分子是N-乙酰氨基-D-葡糖糖胺和D-葡萄糖醛酸是按照摩尔比1:1组成的。其结构如下图所示。
1.1.2 透明质酸的分布
透明质酸广泛分布于高等动物的细胞外基质、结缔组织和器官中。例如[4]皮肤、脐带、关节润滑液、软骨、眼球玻璃体、卵细胞、血管壁以及鸡冠中，其中含量比较高的是在人的脐带、关节滑液、眼玻璃体和鸡冠中。能够用于生产的原料基本为鸡冠[5.6]、人脐带[7]、动物眼球[8-10]、猪皮[11]等，21世纪开始，有人从林蛙皮[12]、蛋壳膜[13]中提取HA。其中从鸡冠中提取透明质酸的报道居多。
1.1.3 透明质酸的性质
HA第一次被发现是在牛眼玻璃体中，在1934年由Meyer[14]分离出来。HA溶于水，不溶于有机溶剂，与许多天然粘多糖的性质相似，例如：固体没有固定形态，呈白色，无臭无，吸水性比较强。HA水溶液的比旋度在-70°~-80°之间，在盐溶液中葡萄糖醛酸中的羧基基团能够解离，解离出的氢离子使HA呈现为酸性多聚阴离子状态，因此透明质酸成酸性粘多糖的性质[4,15,16]。