稀土元素La对小麦根尖DNA甲基化的影响(2)
材料与方法
1.1 材料及药品
北京农科院提供京-17品系小麦种子；lacl3（10mM）母液；改良苯酚品红；解离液。
1.2 实验方法
1.2.1 小麦种子萌发及生根处理
设置对照组（蒸馏水培养即可），配置0.5 mM、1.0 mM、1.5 mM、2.0mM浓度梯度的lacl3+溶液，找五个大小适宜的培养皿，清洗后擦拭干净，在每个培养皿下面垫上滤纸，选取250粒大小均匀、健康小麦置于5个培养皿中，每个培养皿放50个小麦种子，分别中加入等量的蒸馏水和不同浓度梯度的处理液，使种子半浸于处理液。避光22℃恒温处理36小时。
1.2.2 根长统计
分别测量对照组和0.5 mM、1.0 mM、1.5mM、2.0mM lacl3+溶液处理组的小麦主根长，记录各个组每个小麦的主根长。并用graph 5软件作图进一步分析各组的差异。
1.2.3 DNA提取
选择与对照组差异明显的浓度处理组，采用CTAB法提取分别提取对照组和选取组的DNA。(CTAB法提取DNA的大致步骤[14]：1.在液氮条件下快速研磨，加预热的CTAB，水浴。2.冷却后加氯仿、异戊醇，再离心取上清液，重复上面操作。3.再取上清液加一定量的无水乙醇、离心。4.加TE缓冲液溶解、离心5.取上清加乙酸钠、无水酒精，再离心弃上清6.加无水乙醇去除各离子，沉淀DNA溶于TE溶液7.CsCL密度梯度离心加以纯化）。